Контроль якості та ефективність стерилізації. Фізичний контроль режиму стерилізації. Методи контролю ефективності стерилізації Методи контролю стерилізації виробів медичного призначення

У комплексі заходів із стерилізації виробів медичного призначення важливе значення має організація та проведення контролю за її ефективністю. Методи і засоби контролю, що використовуються до цього часу, не завжди дозволяють виявити дефекти стерилізації, що тягне за собою підвищення рівня внутрішньолікарняних інфекцій.

Контроль ефективності роботи стерилізаційного обладнання здійснюється фізичними, хімічними та біологічним (бактеріологічним) методами. Надійність цих методів неоднакова.

Контроль стерилізації

Фізичні та хімічні методи призначені для оперативного контролю та дозволяють контролювати дотримання параметрів режимів парової, газової, повітряної стерилізації, температуру, тиск, експозицію.

Недолік цих методів у тому, що вони можуть бути доказом ефективної стерилізації. Достовірним визначення ефективності є лише бактеріологічний метод.

Фізичні методи

Фізичні методи контролю здійснюються за допомогою засобів вимірювання температури (термометри, термопари), тиску (манометри, мановакуумметри) та часу (таймери). Сучасні стерилізатори оснащені записуючими пристроями, що фіксують окремі параметри кожного циклу стерилізації.

Хімічні методи

Протягом десятків років для проведення хімічного контролю застосовувалися хімічні речовини, що змінюють свій агрегатний стан або колір при температурі, близькій до температури стерилізації (бензойна кислота для контролю парової стерилізації, сахароза, гідрохінон та низка інших речовин для контролю повітряної стерилізації).

При зміні кольору та розплавленні зазначених речовин результат стерилізації визнавався задовільним.

Однак багаторічні спостереження та дані літератури вказують, що при задовільних результатах хімічного контролю за допомогою названих індикаторів, бактеріологічний контроль у ряді випадків (до 12%) виявляє незадовільний результат стерилізації.

Крім того, ці речовини мають значний недолік. Перехід в інший агрегатний стан не дає уявлення про тривалість впливу температури, при якій відбувається їх розплавлення.

Зважаючи на недостатню достовірність використання зазначених індикаторів для контролю, а також значну трудомісткість та незручність їх практичного застосування, у 70-х роках були розроблені хімічні індикатори, зміна кольору яких відбувається за впливу температури, прийнятої для даного режиму, протягом часу, необхідного для стерилізації.

По зміні забарвлення цих індикаторів можна вважати, що основні параметри процесу стерилізації — температура і час — витримані. Тривале застосування таких індикаторів показало їхню високу надійність.

Більш складні індикатори призначені контролю критичних параметрів процесу стерилизации.

До кінця 80-х років не існувало стандартів на хімічні індикатори, що випускаються різними фірмами, і не було спроб класифікувати їх. Лише 1995 року міжнародна організація зі стандартизації (ISO) опублікувала документ «Стерилізація медичних виробів. Хімічні показники. Частина 1".

З січня 2002 року у Росії запроваджено ГОСТ Р ИСО 11140-1 «Стерилізація медичної продукції. Хімічні показники. Загальні вимоги». Згідно з цим документом, хімічні індикатори розподілені на шість класів.

Індикатори 1-го класує індикаторами (свідками) процесу.

Приклад такого індикатора є термоіндикаторна стрічка, що наклеюється перед проведенням стерилізації на текстильні упаковки або стерилізаційні коробки.

Зміна кольору стрічки вказує, що упаковка зазнала впливу процесу стерилізації. Такі ж індикатори можуть поміщатись у набори хірургічних інструментів або операційної білизни.

2-й класіндикаторів призначений для використання у спеціальних тестових процедурах, наприклад, під час проведення тесту Бов'є-Діка (Bowie-Dick test). Цей тест не контролює параметри стерилізації, він оцінює ефективність видалення повітря із камери парового стерилізатора.

Індикатори 3-го класує індикаторами одного параметра. Вони оцінюють максимальну температуру, але не дають уявлення про час її дії. Прикладами таких індикаторів є описані вище хімічні речовини.

4-й клас- Це багатопараметрові індикатори. Вони містять барвники, що змінюють свій колір при поєднаному впливу кількох параметрів стерилізації, найчастіше – температури та часу. Прикладом таких індикаторів є термочасові індикатори для контролю повітряної стерилізації.

5-й клас- Інтегруючі індикатори. Ці індикатори реагують попри всі критичні параметри методу стерилізації. Характеристика цього індикаторів порівнюється з інактивацією високорезистентних мікроорганізмів.

6-й клас- Індикатори-емулятори. Ці індикатори повинні реагувати на контрольні значення критичних параметрів методу стерилізації.

Біологічний метод

Поряд із фізичними та хімічними застосовується бактеріологічний метод контролю стерилізації. Він призначається контролю ефективності стерилізаційного устаткування.

Донедавна для контролю парової та повітряної стерилізації використовувалися проби. садової землі, Що містить мікроорганізми, високорезистентні до впливу стерилізуючих факторів

Проте стійкість мікроорганізмів у різних пробах неоднакова, що дозволяє стандартизувати результати контролю.

В даний час для проведення бактеріологічного контролю використовуються біотести, що мають дозовану кількість спір тест-культури. Контроль ефективності стерилізації за допомогою біотестів рекомендується проводити 1 раз на 2 тижні. У зарубіжній практиці прийнято застосовувати біологічне тестування не менше 1 разу на тиждень.

У ряді випадків виникає необхідність проведення контролю за допомогою біотестів кожного завантаження стерилізатора. Насамперед, мова йдепро стерилізацію інструментів, що використовуються для виконання складних оперативних втручань, що вимагають застосування високонадійних стерильних матеріалів.

Кожне завантаження виробів, що імплантуються, також має піддаватися бактеріологічному контролю. У цьому використання простерилізованих матеріалів затримується до отримання негативних результатів контролю.

Тих же принципів щодо періодичності контролю рекомендується дотримуватися щодо газової стерилізації, що є в порівнянні з іншими методами більш складною.

Джерело: http://steriliz.narod.ru/07contr.htm

Стерилізація: поняття, методи, режими

Стерилізація – (від лат. обезкладення) – це повне знищення м/о та їх суперечка шляхом впливу як фізичних факторів, так і хімічних препаратів. Стерилізація проводиться після дезінфекції ПСО та контролю якості ПСО. Стерилізація є найважливішою ланкою, останнім бар'єром профілактики ВЛІ у ЛПЗ. Вона захищає пацієнта від будь-якої інфекції.

Документи, які регламентують методи стерилізації.

Необхідно пам'ятати, що для проведення стерилізації необхідно знати та вміти застосовувати закони, інструкції, правила та ін. інструктивно-методичні документи в галузі інфекційної безпеки. В даний час діє галузевий стандарт (зуп. 42-21-8-85, що визначає методи, засоби та режими стерилізації та дезінфекції виробів мед.

призначення, доповнений наказом №408 «Методичними вказівками з дезінфекції, ПСО і стерилізації, предметів медичного призначення», затверджений МОЗ Росії 30 грудня 1998г. №МУ-287-113.

Ці документи є обов'язковими та визначальними для всіх ЛПЗ та дають можливість широкого вибору засобів та методів найбільш підходящих в умовах даного ЛПЗ. Стерилізації піддаються всі вироби, що стикаються з рановою поверхнею, що контактують із кров'ю або ін'єкційними препаратами та окремі види мед.

інструментів, які в процесі експлуатації стикаються зі слизовими оболонками, можуть викликати їх пошкодження. "Стерильність" - стан медичного виробу, коли він не містить життєздатних м/о.

Методи стерилізації розрізняють:

• фізичний (термічний): паровий, повітряний, гласперленовий;
• хімічна: газова, хімічні препарати, радіаційний;
• плазмовий та озоновий (група хімічних речовин).

Вибір того чи іншого методу стерилізації залежить від властивостей об'єкта та самого методу – його переваг та недоліків.

Вироби в упаковці стерилізують при децентралізованій або централізованій системах, а також на промислових підприємствах, що випускають ІМН одноразового застосування.

Вироби без упаковки стерилізують лише за децентралізованої системи ЛПЗ. Паровий та повітряний методи стерилізації – найпоширеніші у ЛПЗ.

Стерилізатори: паровий, повітряний, газовий.

Паровий метод:

Надійний нетоксичний, недорогий, забезпечує стерильність не лише поверхні, а й усього виробу. Його здійснюють при порівняно невисокій температурі, він має щадну дію на оброблюваний матеріал, дозволяючи стерилізувати вироби в упаковці, завдяки чому попереджається небезпека повторного обсіменіння м/о.

Стерилізуючий агент при цьому методі – водяна насичена пара під надлишковим тиском.

Режими стерилізації:

• 1-й режим (основний) - t 1320, 2 атм., 20` - призначений для виробів з бязі, марлі, скла, включаючи шприци з позначкою "2000С", виробів з корозійно-стійкого металу.
• 2-й режим (щадний) – t 1200, 1,1 атм., 45` - рекомендується для виробів з тонкої гуми, латексу, поліетилену високої щільності.
• 3-й режим - t 1340, 2 атм., 5 `.

Умови проведення стерилізації: усі вироби, що стерилізуються парою під тиском, попередньо поміщають упаковку – коробки стерилізації (бікси або контейнери). З фільтром або без фільтрів, крафт-пакети та ін упаковку, призначену для парової стерилізації.

Термін зберігання стерилізації виробів залежить від упаковки:

1. вироби, що простерилізовані у стерилізаційних коробках без фільтра (КС) – 3 доби (72 години);
2. у стерилізаційних коробках із фільтром (КФ) – до 20 діб, за умови щомісячної зміни фільтрів;
3. у подвійній м'якій упаковці з бавовняної тканини, крафт-паперу – 3 діб. (72 години).

Недоліки методу:

• викликає корозію інструментів із нестійких металів;
• перетворюючись на конденсат, зволожує вироби, що стерилізуються, тим самим покращуючи умови зберігання і збільшуючи небезпеку повторного обсіменіння м/о.

Повітряний метод.

Стерилізуючий агент – сухе гаряче повітря. Відмінна особливість методу – не відбувається зволоження упаковки та виробів, і пов'язаного з цим зменшення терміну стерильності, а також корозії металів.

Режими стерилізації:

• 1-й режим (основний) - t 1800 - 60 хв. – призначений для стерилізації виробів зі скла, включаючи шприци з позначкою «2000С», виробів з металу, у тому числі корозійно-стійких металів.
• 2-й режим (щадний) - t 1600 - 150 хв. – призначений для стерилізації виробів із силіконової гуми, а також деталей деяких апаратів та приладів.

Умови проведення стерилізації: вироби стерилізуються без пакування на сітках з упакованими в папір пакувальними, які відповідають вимогам діючого галузевого стандарту.

Недоліки методу:повільне та нерівномірне прогрівання виробів, що стерилізуються; необхідність використання вищих температур; неможливість використання для стерилізації виробів із гуми, полімерів; нездійсненність використовувати всі пакувальні матеріали.

Примітки:стерилізації піддають сухі вироби; вироби, простерилізовані в крафт-пакеті, упаковці без паперу мішкової вологоміцної, зберігають – 3 діб.

(72 години); у 2-шаровій упаковці з паперу кріпленого для мед.

цілей – до 20 діб; вироби, що простерилізовані без упаковки, повинні бути використані безпосередньо після стерилізації протягом робочої зміни (6 годин) в асептичних умовах.

Гласперленовий метод.Стерилізують суцільнометалеві стоматологічні, косметологічні інструменти, занурюючи серед скляних кульок, нагрітих до 190-2500.

Джерело: https://megaobuchalka.ru/8/32842.html

Контроль якості стерилізації

Надійність стерилізації визначають такі фактори;

• можливості та технічний стан стерилізаційної апаратури;
• дотримання правил та режимів стерилізації;
• якість передстерилізаційної очистки',
• кваліфікація парамедиків;
• вибір методу стерилізації.

На жаль, досі в РФ все ще використовують індикатори плавлення. До недоліків можна віднести їхнє приблизне свідоцтво про досягнення необхідної температури.

Незважаючи на складну фінансову ситуацію в країні, ЛПЗ набувають сучасних термочасових індикаторів стерилізації одноразового застосування- «Вінар», «Стерикінг», «Медтест», які дозволяють забезпечити достатній контроль процесу стерилізації.

Методи контролю стерилізації можуть бути:

1. оперативними;
2. довгостроковими.

1. Оперативні методи контролю- ті які проводяться безпосередньопісля стерилізації.

Оперативні засоби контролю:

• візуальні засоби;
• манометри;
• термометри;
• вакуумметри;
• максимальні термометри;
• хімічні засоби - скляні індикатори (всередині знаходяться хімічні речовини, які змінюють свій колір за певної температури).Маса має забарвлюватися однорідно!

Для парових стерилізаторів:

1. « Стериконт», «Стеритест» (стрічка) – 132 °С – 20 хв;
2. «Вінар» (стрічка) – 120 °С – 45 хв.

Для повітряних стерилізаторів:

• "Вінар" (стрічка) -180 ° С - колір "хакі";
• "Стерикінг" - 180 ° С - чорний.

Використовують рідко:

• винну кислоту - 170 ° С - стікає та стає білою;
• гідрохінон -169 -171 °С - чорний;
• тіомочевину - 180 ° С - яскраво-жовтий колір.

В даний час, крім термочасових індикаторів контролю стерилізації "Вінар", "Стерікінг", використовують велику кількість більш сучасних термочасових індикаторів.

Джерело: https://studopedia.net/3_77236_kontrol-kachestva-sterilizatsii.html

Контроль якості та ефективність стерилізації

Контроль дозволяє покращити якість стерилізації у ЛПЗ. Він передбачає визначення ефективності та параметрів стерилізації.

Надійність повітряної стерилізації залежить від конструкції стерилізатора, його справності, схеми і обсягу завантаження, використовуваної захисної упаковки, застосовуваних методів оперативного і періодичного контролю, підготовки персоналу, що обговорює стерилізатор.

Проблема надійності особливо актуальна при експлуатації апаратів застарілих типів, за відсутності доступних методів контролю стерилізації.

Контроль ефективності стерилізації в повітряному стерилізаторі здійснюється бактеріологічним методом і хімічними термочасовими індикаторами.

Бактеріологічний метод контролю проводять за допомогою біотесту - об'єкта з певного матеріалу, що обсіменений тест-мікроорганізмами. Як носії використовують невеликий флакон, що містить суперечки B.Licheniformis.

Контроль проводять відповідно до затвердженої методики. Існують і готові сертифіковані випробування зі спорами B.

Licheniformis з кольоровими живильними середовищами, що дозволяють провести бактеріологічний контроль безпосередньо в ЦЗЗ за наявності в ньому термостата.

Контролює повітряну стерилізацію хімічними термочасовими індикаторами. Для оперативного контролю раніше рекомендували численні хімічні речовини, точка плавлення яких відповідає температурі стерилізації.

Але на сьогоднішній день всім ясно, що вони не можуть вважатися надійними індикаторами, оскільки не дають уявлення про час впливу гарячого повітря на виріб.

Такий контроль має орієнтовний характер і не гарантує досягнення стерильності у процесі стерилізації.

Надійність оперативного контролю істотно підвищується при використанні індикаторів інтегрованої дії, зокрема НП фірми «Вінар» ІС-160 та ІС-180, що змінює забарвлення до кольору еталона тільки при впливі на них температури стерилізації протягом усієї стерилізаційної витримки.

Смужки індикатора закладаються в контрольні точки стерилізатора при кожному циклі стерилізації. Якщо забарвлення індикатора після стерилізації в будь-якій точці світліше еталона, всі вироби вважаються нестерильними.

Пакети з пергаментного паперу, що використовуються для пакування, при стерилізації в сучасній апаратурі, що стерилізує, мають подібний індикатор, нанесений у фабричних умовах.

Надійність парової стерилізації залежить від кількох факторів:

• дотримання умов експлуатації;
• точності контрольно- вимірювальних приладів, встановлених на стерилізаторі;
• повноти видалення повітря із виробів, що стерилізуються;
• герметичність камери стерилізатора.

Методи періодичного контролю парових стерилізаторів викладено у системі «чистий інструмент». Вони включають:

• перевірку точності манометра;
• перевірку точності реєстрації самописцями температури та тиску;
• контроль герметичності камери стерилізатора;
• контроль якості автоматичного вакуум-тесту;
• контроль ефективності сушіння текстильних матеріалів;
• перевірку повноти видалення повітря із виробів, що стерилізуються. Визначення ефективності бактеріологічним методом у паровому стерилізаторі здійснюється тестами, що містять суперечки B.Stearothermophilus відповідно до методики, затвердженої МОЗ РФ.

Оперативний контроль парової стерилізації проводять хімічними індикаторами інтегрованої дії (термочасовими).

Індикатори плавлення (тіомочевина, бензойна кислота та ін.), які все ще використовуються в деяких ЛПЗ, не є індикаторами стерильності, оскільки реєструють лише температуру, але не враховують стерилізаційну витримку (час стерилізації).

Індикатори фірми «Вінар» ІС-120 та ІС-132, також, як і в повітряному стерилізаторі, змінюють забарвлення до обліку еталона тільки при впливі на них температури стерилізації протягом усієї стерилізаційної витримки.

При кожному циклі смужки індикатора закладаються в контрольні точки стерилізатора. Якщо забарвлення індикатора в якій-небудь точці світліше еталона, всі вироби вважаються нестерильними.

Джерело: https://vuzlit.ru/828921/kontrol_kachestva_effektivnost_sterilizatsii

Хімічна стерилізація

Хімічна стерилізація - найбільш проблематичний і трудомісткий спосіб стерилізації матеріалу. Використовується лише тоді, коли інші способи застосувати неможливо. В основному хімічна стерилізація використовується для обробки апаратів із тонковолокнистою оптикою (ендоскопічне обладнання, гортанні клинки тощо).

Вимоги до умов проведення хімічної стерилізації:

• Окреме приміщення з обробкою, що дозволяє проводити вологі дезінфекційні роботи: кахельне покриття стін на всю висоту, плиткове покриття підлоги, стійкість до вологи стелі.
• Бактерицидне опромінення проводиться за режимом приміщень з асептичним режимом.
• Наявність 2 раковин (для рук, обладнання).
• Наявність щонайменше 3 столів (розподіл потоків технологічного процесу).
• Всі ємності та додаткові інструменти (шприци, пінцети, корнцанги) повинні бути стерильними і використовуватися тільки на одну партію, що обробляється. Ємності використовують із скла, металів, термостійких пластмас, що витримують автоклавування.
• Персонал повинен використовувати стерильний спецодяг та засоби захисту.

Для проведення хімічної стерилізації до кабінету доставляють інструментарій, що пройшов дезінфекцію, передстерилізаційне очищення, в сухому вигляді. Інструменти та апарати занурюють у ємність із хімічним стерилянтом. Стерилізацію проводять за повного занурення. Вільно розкладаючи інструменти, заповнюючи канали розчином за допомогою шприца.

При великій довжині виробу їх укладають у ємність по спіралі. Рознімні вироби стерилізують у розібраному вигляді. Після закінчення експозиції вироби виймають з ємності за допомогою стерильних пінцетів, зливаючи залишки стерилянта, і переносять у ємність зі стерильною дистильованою водою.

Канали та ємності промивають стерильною водою за допомогою шприца так, щоб промивні води не потрапляли в ємність зі стерильною водою. Потім канали заповнюють стерильною водою та виріб залишають у воді на 10-15 хвилин (час відмивання визначається методичними вказівками до препарату). Після закінчення часу процес повністю повторюють у наступній ємності.

У кожній ємності працюють окремими шприцами та пінцетами. Потім, вироби викладають на окремий стіл у стерильне простирадло. Канальні та довгі інструменти доцільно просушувати за допомогою стерильного спирту (промивання, протирання). У фармакопеї існує пропис приготування етилового спиртуна стерильній воді у асептичних умовах.

По закінченні просушування стерильні вироби упаковують в стерильний бікс, викладений стерильним простирадлом або в 2-шарову бязеву упаковку.

Термін зберігання матеріалу, що пройшов хімічну стерилізацію, становить не більше 3 діб від моменту стерилізації упаковки.

Контроль якості стерилізації:

• Візуальний контроль. Перевіряють правильність використання пакувальних матеріалів, рівень завантаження упаковок та стерилізаційних камер, обґрунтованість вибраного методу стерилізації.
• Фізичний контроль. Оцінюють показники контрольно-вимірювальних приладів апаратури, що стерилізує: максимальних термометрів, монометрів і рівень відхилення від нормативів. Поза пакувальним розміщенням та тест-індикаторами всередині пакувального розміщення.
• Хімічний контроль. Здійснюють за допомогою хімічних тест-індикаторів. На сьогоднішній день необхідно використовувати тест-індикатори 4 покоління, які дозволяють контролювати всі параметри стерилізації (тиск, температура, час). Розрізняють тест-індикатори для контролю поза упаковкою та всередині упаковки.

Слід пам'ятати, що внутрішні та зовнішні тест-індикатори повинні використовуватися строго за призначенням.

Внутрішні індикатори розміщуються всередині упаковки на 3 рівнях при однорідному укладанні (при змішаній закладці – у кожен вид матеріалу, що стерилізується, поміщають додатковий тест).

Внутрішні тест-індикатори дозволяють контролювати параметри стерилізації усередині упаковки. Зовнішні тест-індикатори контролюють параметри стерилізації всередині камери стерилізації і розміщуються в певних точках камери.

Тест-індикатори оцінюються безпосередньо після закінчення стерилізації (зовнішні тест-індикатори) та після відкриття упаковки (внутрішні тест-індикатори).

Оцінюються усі тест-індикатори. За наявності одного тест-індикатора не відповідного стандарту матеріал вважається не стерильним, і використовуватися не може.

Правила закладки тест-індикаторів у стерилізаційні упаковки:

• в однорідних укладаннях тест-індикатори закладаються на три рівні (вниз-середина-верх);
• у комбінованих укладаннях тест-індикатори закладають на три рівні (низ-середина-верх) та додатково в середину кожного виду матеріалу;
• у м'які укладання малого обсягу допустимо закладати одні тест-індикатор у середину укладання.

Тест-індикатори зберігаються весь час укладання.

Щоквартально проводять контроль роботи стерилізаційної парової камери за допомогою стандартного модуля – паралепіпед з 17 простирадлом розміром: 300-300-900мм – «ляльки».

Лялька - 9 внутрішніх тест-індикаторів. Які закладають по середині 17 простирадлами (між 8 і 9 простирадлами). Простирадла загортають у двошарове простирадло і проводять повний цикл стерилізації в автоклаві.

Бактеріологічний контроль.З метою оцінки ефективності стерилізації проводять бактеріологічні дослідження за допомогою біотестів та дослідження змивів на стерильність.

Змив на стерильність забирають з інструментів безпосередньо після відпрацювання режиму стерилізації та інструментів, підготовлених до роботи (зі стерильного столу або лотка). Забір змивів здійснює медсестра, яка безпосередньо бере участь у роботі зі стерильним матеріалом.

Кратність досліджень визначається вимогами наказу МОЗ СРСР №254 "Про розвиток дезінфекційної справи в країні". Для операційного блоку, відділень реанімації дослідження якість стерилізації проводиться 1 разів у 10 днів, інших режимних кабінетів – 1разів у місяць.

Контроль стерилізації з допомогою біотестів проводиться у межах виробничого контролю – щокварталу. Після ремонту апаратури, що стерилізує, контроль біотестами обов'язковий.

Контроль ефективності стерилізації здійснюється фізичними, хімічними та бактеріологічними методами.

До фізичних методів контролю належать: вимірювання температури, тиску та часу застосування стерилізації.

Для проведення хімічного контролю протягом десятиліть застосовувалися хімічні речовини, що мають температуру плавлення, близьку до температури стерилізації. Такими речовинами були: бензойна кислота – для парової стерилізації; сахароза, гідрохінон та деякі інші -для контролю повітряної стерилізації. Якщо відбувалося розплавлення та зміна кольору зазначених речовин, то результат стерилізації визнавався задовільним. Оскільки застосування вищевказаних індикаторів є недостатньо достовірним, в даний час впроваджені у практику контролю термічних методів стерилізації хімічні індикатори, колір яких змінюється під впливом температури, адекватної конкретному режиму, для певного часу, необхідного для реалізації даного режиму. По зміні забарвлення індикаторів судять про основні параметри стерилізації - температуру та тривалість стерилізації. З 2002 року у Росії введено у дію ГОСТ РИСО 11140-1 «Стерилізація медичної продукції. Хімічні показники. Загальні вимоги», в якому хімічні індикатори розподілені на шість класів:

До 1 класувіднесено індикатори зовнішнього та внутрішнього процесу, які розміщуються на зовнішній поверхні упаковки з медичними виробами або всередині наборів інструментів та операційної білизни. Зміна кольору індикатора вказує на те, що упаковка зазнала процесу стерилізації.

До 2 класувідносять індикатори, які не контролюють параметри стерилізації, а призначені для застосування у спеціальних тестах, наприклад, на підставі таких індикаторів оцінюють ефективність роботи вакуумного насоса та наявність повітря в камері стерилізатора парового.

До 3 класувідносяться індикатори, за допомогою яких визначається один параметр стерилізації, наприклад мінімальна температура. Однак вони не дають інформації про час дії температури.

До 4 класувідносять багатопараметрові індикатори, що змінюють колір при дії кількох параметрів стерилізації. Прикладом таких індикаторів є індикатори парової та повітряної стерилізації одноразового застосування ІКПВС-Медтест.

До 5 класувідносять інтегруючі індикатори, реагують попри всі критичні параметри методу стерилізації.

До 6 класувідносять індикатори-емулятори. Індикатори відкалібровані за параметрами стерилізації, при яких вони застосовуються. Ці індикатори реагують попри всі критичні параметри методу стерилізації. Емулюючі індикатори є найсучаснішими. Вони чітко реєструють якість стерилізації при правильному співвідношенні всіх параметрів - температури, насиченої пари, часу. У разі недотримання одного з критичних параметрів індикатр не спрацьовує. Серед вітчизняних термочасових індикаторів використовуються індикатори "ІС-120", "ІС-132", "ІС-160", "ІС-180" фірми "Вінар" або індикатори парової ("ІКПС-120/45", "ІКПС-132/ 20») та повітряної («ІКПВС-180/60» та «ІКВС-160/150») стерилізації одноразового застосування ІКВС фірми «Медтест».

Усі операції з індикаторами – виїмка, оцінка результатів – здійснюються персоналом, який проводить стерилізацію.

Оцінку та облік результатів контролю проводять, оцінюючи зміни кольору початкового стану термоіндикаторної мітки кожного індикатора, порівнюючи з колірною міткою Еталону порівняння.

Якщо колір кінцевого стану термоіндикаторної мітки всіх індикаторів відповідає кольоровій мітці Еталону порівняння, це свідчить про дотримання необхідних значень параметрів режимів стерилізації в камері стерилізації.

Допускаються відмінності в інтенсивності глибини фарбування термоіндикаторної мітки індикаторів, зумовлені нерівномірністю допустимих значень температури в різних зонах камери стерилізації. Якщо термоіндикаторна мітка хоча б одного індикатора повністю або частково зберегла колір, легко відмінний від кольору еталонного стану, це свідчить про недотримання необхідних значень параметрів стерилізації в стерилізаційній камері.

Індикатори та Еталони порівняння мають збігатися за номерами партій. Забороняється оцінювати результати контролю стерилізації, використовуючи індикатори різних партій.

Оцінку відповідності зміни кольору термоіндикаторної мітки в порівнянні з Еталоном проводять при освітленості не менше 215 лк, що відповідає матовій лампі розжарювання 40 Вт, з відстані не більше 25 см. Для проведення бактеріологічного контролю в даний час застосовуються біотести, що мають дозу спор тест-культур . Існуюча методика дозволяє оцінювати ефективність стерилізації не раніше як за 48 годин, що дозволяє застосовувати вже простерилізовані вироби до отримання результатів бактеріологічного контролю.

Біологічний індикатор є препаратом з патогенних споро-утворюючих мікроорганізмів з відомою високою стійкістю до даного типу стерилізаційного процесу. Завданням біологічних індикаторів є підтвердження здатності стерилізаційного процесу вбивати стійкі мікробні суперечки. Це найбільш критичний та достовірний тест стерилізаційного процесу. Застосовуються біологічні індикатори як контроль завантаження: якщо результат позитивний (мікробне зростання), то використовувати дане завантаження не можна і необхідно відкликати всі попередні завантаження до останнього негативного результату. Для отримання достовірної біологічної відповіді слід використовувати лише ті біологічні індикатори, які відповідають міжнародним стандартам ЄК 866 та ISO 11138/11135. З використанням біологічних індикаторів виникають певні труднощі - необхідність наявності мікробіологічної лабораторії, навченого персоналу, тривалість інкубації багаторазово перевищує тривалість стерилізації, необхідність карантину (неможливість використання) простерилізованих виробів до отримання результатів. Через зазначені вище труднощі у застосуванні біологічного методув амбулаторній стоматологічній практиці зазвичай використовується фізичний та хімічний метод контролю ефективності стерилізації.

Індикатори стерилізації – пристрої, які застосовуються для контролю якості стерилізації у стерилізаційних апаратах.

Для знищення мікроорганізмів, грибків, плісняви, вірусів, інфекцій використовується доступний і ефективний спосіб- Стерилізація. Для забезпечення стерильності медичних виробів застосовуються різні за конструкцією, типом впливу, принципом роботи спеціальні апарати: парові, сухожарові, ультрафіолетові, ультразвукові стерилізатори.

Якість стерилізації залежить від кількох факторів:

• підбір апаратури відповідно до особливостей інструментарію;
• правильна організація процесів обробки, дезінфекції;
• контроль стерилізації;
• дотримання норм упаковки та зберігання виробів.

Контроль стерилізації передбачає здійснення різних завдань – дотримання параметрів, свідчення проходження, моніторинг ефективності та якості стерилізаційної обробки. Залежно від завдань та цілей можна вибрати потрібний індикатор стерилізації або їхню комбінацію.

Методи контролю ефективності стерилізації та класифікація індикаторів

Об'єктивна оцінка ефективності стерилізації передбачає комплексний підхід із застосуванням наступних методів контролю:

• фізичний;
• хімічний;
• біологічний.

Фізичний метод передбачає наявність вимірювальних приладів, датчиків (термометр, манометр, таймер), за допомогою яких вимірюються параметри роботи апарату: температура, тиск, час. Порушення стандартних режимів роботи (низький температурний режим, не відповідність тривалості стерилізаційної дії чи тиску тощо) сигналізує про можливий збій у процесі роботи обладнання.

Хімічний метод – здійснюється за допомогою хімічних індикаторів, які змінюють колір чи фізичні властивості залежно від умов та параметрів стерилізації: температура, тривалість дії, насиченість пари, відносна вологість.

Хімічні індикатори контролю якості поділяються на 6 класів.

Перший клас – термоіндикаторні стрічки процесу стерилізаційної обробки, що наклеюються на упаковки, коробки з медичним текстилем, хірургічним приладдям перед проведенням обробки. Зміна кольору свідчить про наявність стерилізаційного впливу.

Другий – оцінює якість пари чи видалення повітря у парових стерилізаторах. Цей одноразовий індикатор призначений для проведення спеціальних тестових процедур, наприклад тест Бові-Діка.

• Третій – термохімічні пристрої, які можуть зафіксувати лише один критичний параметр: бензойна кислота, максимальна температура, гідрохінон, тиск.
• Четвертий – багатопараметрові покажчики, які можуть використовуватися всередині камери або упаковки. Здатні зафіксувати та відобразити два і більше параметри обробки (температура, тривалість дії).
• П'ятий клас – інтегратори, колір яких змінюється лише тоді, коли всі критичні параметри обробки дотримані. Здатні також відображати рівень загибелі біотестів.
• Шостий – найточніші емулятори, здатні зафіксувати сувору відповідність регламентованих значень усіх критичних параметрів.

Біологічний метод - високоефективний, достовірний спосіб контролю якості роботи стерилізаційного обладнання. Проводиться із застосуванням біотестів, на яких нанесена дозована кількість спір конкретної тест-культури. Цей високонадійний спосіб перевірки показаний до застосування при роботі з виробами, що вимагають високого стерильності: хірургічні інструменти, матеріали, операційне приладдя. Проводиться він 1 раз на 2 тижні або 1 раз на тиждень (відповідно до зарубіжної практики).

Перші два методи є досить популярними і використовуються для швидкої оцінки параметрів роботи парових, газових, повітряних апаратів, однак вони не можуть забезпечити точну інформацію про ефективність проведеної стерилізації. Достовірну інформацію якість проведеної стерилізації дає лише біологічний метод.

Контроль якості стерилізації є гарантією стерильності та безпеки медичних інструментів, аксесуарів, обладнання. Збереження стерильності виробів також потребує наявності відповідних умов зберігання: відсутність комах, дрібних гризунів; виключення перепадів температури, вологості; запобігання виникненню пошкоджень, зламів, подряпин на упаковках, коробках.

Переглянути різні види індкаторів можна на сайті polihrom.com компанія спеціалізується на забезпеченні лабораторій витратними матеріалами та обладнанням.

Матеріали Другого наукового симпозіуму за значенням біологічних індикаторів контролю стерилізації, що відбувся Москві 09 грудня 1998 р.

М.І. Леві, Ю.Г. Сучков, В.Я. Безсонова, Ю.С. Зуєва, В.Г. Слізкова, М.М. Лівшиць, Н.М. Панкова, Г.І. Рубан, С.М. Савенко, О.П. Мітюков, І.І. Корнєв, А.І. Воронків
Випробувальний лабораторний центр МГЦД, КБ УД Президента РФ,
Московська медична академія ім. Сєченова, ЦКЛ МЦ УД Президента РФ

Для розрахунку середнього значення числа життєздатних суперечок, що припадають на один біологічний індикатор, доцільно скористатися розподілом Пуассона. Лінійний характер залежності логарифму числа життєздатних клітин від часу стерилізації не підтверджується результатами експериментів. Використання в експериментах з контролю стерилізації значної кількості біологічних індикаторів, високоінформативної живильного середовища та тривалих термінів культивування біологічних індикаторів дозволило виявляти в них життєздатні суперечки після стерилізації частіше, ніж зазвичай і практично при всіх режимах, що вживаються в практиці. Висів вмісту біологічних індикаторів після стерилізації на щільне живильне середовище підтвердили відповідність розподілу чашок Петрі за кількістю вирослих колоній розподілу Пуассона, а це означає випадковий та ізольований розподіл життєздатних суперечок у біологічних індикаторах. У деяких експериментах кількість біологічних індикаторів з життєздатними спорами після тривалих термінів стерилізації перевищувала кількість таких після коротких термінів стерилізації, що не знаходило собі пояснення в рамках прийнятих уявлень про стерилізацію. Ми припустили, що стерилізація є загасаючим хвилеподібним автоколивальним процесом, це і становить сутність залежності логарифму числа життєздатних суперечок в біологічних індикаторах від часу стерилізації.
p align="justify"> Контроль стерилізаторів, що експлуатуються в лікувальних закладах Москви, показав, що в усіх випадках залишаються біологічні індикатори, що містили життєздатні суперечки після стерилізації. Рекомендована в стандартах ймовірність незадовільних результатів аналізу біологічних індикаторів (10 -6) значно менша за ту, яка досягнута в наших дослідженнях.
Експериментальна парова стерилізація відрізків трубочок із синтетичних матеріалів після передстерилізаційного очищення супроводжувалася несприятливими результатами, аналогічними тим, що були отримані з біологічними індикаторами.
Число життєздатних суперечок в біологічному індикаторі після стерилізації є імовірнісною величиною, а їх виявлення залежить від числа індикаторів у камері стерилізації, якості живильного середовища і тривалості культивування при потрібній температурі.

p align="justify"> Адекватним інструментом оцінки ефективності стерилізації є біологічні індикатори, які значною мірою імітують обсіменені мікроорганізмами медичні вироби, що піддаються стерилізації. Остання надмірна в тому сенсі, що вона розрахована на знищення такої кількості мікробів, які зазвичай на виробах не виявляють, але які в принципі хоч і в окремих випадках виключити не можна. Тому біологічні індикатори містять стійкі до стерилізуючого агенту суперечки в кількості на 2-3 порядки вище тієї кількості, яка зазвичай зустрічається на виробах, що стерилізуються . Такий підхід диктується масовим застосуванням стерилізації в медичної практикита необхідністю виключення ризику зараження хворих та здорових за рахунок неефективної стерилізації.

У зв'язку з тим, що більшість дослідників дотримується переконання, що логарифм числа мікроорганізмів у біологічному індикаторі або на медичних виробах є лінійною функцією часу стерилізації, тимчасові рамки можуть бути розраховані з достатньою визначеністю. До теперішнього часу на практиці застосовуються кілька видів стерилізації — парова, горячевоздушная, газова, радіаційна, променева та інших. Відомі великі виробникистерилізаційної апаратури - "МММ", "Луки", "Джонсон і Джонсон" та ін.

Ми поставили за мету визначити оптимальні умови для застосування біологічних індикаторів у процесі стерилізації. Основним об'єктом досліджень стали біологічні індикатори з метою оцінки парової стерилізації. Біологічні індикатори готувалися та оцінювалися у нашій лабораторії відповідно до прийнятими нормами. Методичні особливості цього дослідження описані під час викладу отриманих результатів.

Щоразу, коли готується чергова партія суперечка Bacillus stearothermophilus для біологічних індикаторів, що контролюють парову стерилізацію, відчувають їхню термостійкість. Потрібно, щоб готові біологічні індикатори (приблизно 10 6 спор в індикаторі) містили життєздатні суперечки після 5-хвилинної парової стерилізації при 120-121 про, але після 15 хвилинної стерилізації при зазначених умовах таких не містили. Виробничі серії біологічних індикаторів, що їх випускає наша установа, відповідають цим вимогам. Наш досвід охоплює вже понад 70 виробничих серій суперечок В. stearothermophilus, з яких було виготовлено мільйони біологічних індикаторів. Кожну серію біологічних індикаторів неодноразово перевіряли на термостійкість, у зв'язку з чим нагромадився неабиякий матеріал. Ми змогли переконатися в тому, що до 15 хвилин перебування в автоклаві при 121 о С зазвичай життєздатні суперечки в біологічних індикаторах не виявляються, проте в поодиноких випадках з 10 індикаторів (як правило, таку кількість індикаторів брали на одну експозицію) 1 або 2 тести містили живі суперечки.

У міжнародних стандартах рекомендується для визначення кількості суперечок у біологічних індикаторах після різних експозицій при 120-121 про З виробляти висіви вмісту індикаторів на щільне живильне середовище, а потім культивувати в термостаті та підраховувати кількість колоній. Таку методику рекомендують для тих експозицій, де передбачається виявити число колонієутворюючих одиниць (СЕ) більше 50 і менше 1000 .

Для тих експозицій, при яких передбачається середня кількість суперечок у біологічному індикаторі менше 1 (тобто не в кожному індикаторі будуть виявлені життєздатні суперечки), рекомендовано використовувати для підрахунків розподіл рідкісних і випадкових подій- Розподіл Пуассона.

Нижче наведено спосіб застосування розподілу Пуассон для зазначених цілей.
Р х = e-m * m x / x!
де Р х - частка біологічних індикаторів з конкретним числом життєздатних суперечок х;
х - конкретне число суперечка в індикаторі;
х! — добуток цілих чисел у послідовності х (х-1) (х-2) ... [х- (х-1)];
m - середня кількість суперечок у групі біологічних індикаторів;
е - експонента.

Якщо деяка кількість біологічних індикаторів не містить життєздатних суперечок (х = 0), тоді
P 0 = k/n,
де k - Число біологічних індикаторів, що не містять живі суперечки;
n – число біологічних індикаторів у групі.

Прологарифмуємо наведене рівняння розподілу Пуассона:
ln Р х = ln (e-m * m x / x!).

Враховуючи, що 0! = 1, а m 0 = 1, то (ln k - ln n) = -m; m = ln n - ln k.

Іншими словами, середня кількість суперечок на один біологічний індикатор у групі дорівнює різниці натуральних логарифмів числа всіх біологічних індикаторів та числа біологічних індикаторів без живих суперечок. Справедливість наведеного способу визначення середньої кількості суперечок однією біологічний індикатор підтверджується висівами на агар (рис. 8).

Рис. 8. Результати випробування біологічних індикаторів зі спорами, висушеними на хроматографічному папері (10 6 суперечки біологічному індикаторі, парова стерилізація 121 про С - 45 хв., індикатор типу Attest). По осі ординат – число біологічних індикаторів. Лівий стовпчик - результати випробувань для звичайних біологічних індикаторів, правий - для біологічних індикаторів з новим живильним середовищем. Заштрихована частина стовпчиків – кількість біологічних індикаторів із життєздатними спорами.

Наводимо приклад розрахунків. У стерилізаційну камеру помістили 20 біологічних індикаторів, а після експозиції в кожен біологічний індикатор прилили кольорове живильне середовище (використовувані в нашій лабораторії серії живильного середовища реагували зміною кольору на присутність одиничних живих спор в біологічному індикаторі 5). З 20 використаних у прикладі біологічних індикаторів зміна бузкового кольору живильного середовища на жовтий зазначено в 14, а в 6 індикаторах колір середовища залишився колишнім після культивування термостаті. Звідси m = (ln 20 - ln 6) = 2,996 - 1,792 = 1,204. Тепер якщо ми хочемо включити цю величину m до системи координат десяткового логарифму числа суперечок у біологічних індикаторах та часу необхідно взяти lg m = lg 1,204 = 0,081.

При численних визначеннях термостійкості суперечка зрідка спостерігалося таке явище, коли 1-2 біологічні індикатори з 10 містили життєздатні суперечки після 15-хвилинного автоклавування. У деяких експериментах ми розширили набір експозицій, включивши експозиції 20, 25, 30 і 35 хв. автоклавування. У деяких, хоча й поодиноких випадках, ми відзначали існування живих суперечок у біологічних індикаторах і після тривалих експозицій автоклавування. Трактування подібних несподіваних результатів як випадкових не могло бути визнано правочинним, тому що не мало пояснень. Найбільш правдоподібним виглядало припущення про існування в популяції суперечок термостійких особин, які залишаються життєздатними після тривалих експозицій. Однак це припущення не підтвердилося, оскільки потомство суперечка з пожовклих біологічних індикаторів після 20-40 - хвилинного автоклавування мали термостійкість того ж рівня, що і вихідна спір.

До описаної проблеми додалася й інша, пов'язана із сумнівами в лінійній залежності логарифму числа спор у біологічному індикаторі від часу стерилізації. Складалося враження, що й спостерігається лінійна залежність, вона проявляється лише окремих ділянках графіка. Що стосується термінів зміни забарвлення живильного середовища в біологічних індикаторах після автоклавування, то в практичній діяльності вони обмежувалися 48 годинами (такий термін рекомендований в інструкціях, що мають ходіння в Росії, США та європейських країнах, хоча ще 10 років тому, коли не використовувалися кольорові середовища , спостереження за появою каламутності в поживному бульйоні тривало щонайменше 7 днів). Однак у наших експериментах було помічено, що зміна кольору живильного середовища при культивуванні в термостаті настає не тільки в перші 48 год., а й у наступні дні, особливо в тих біологічних індикаторах, які відносно довго перебували у камері стерилізації.

Якщо в попередні роки ми використовували як носій спор інсулінові флакони, то в Останнім часомперейшли на пробірки Епендорфа з поліпропілену ємністю 1,5 мл. Ця ємність виявилася набагато зручнішою як носій суперечка, ніж інсулінові флакони.

Враховуючи все сказане вище, ми вирішили застосувати в цьому дослідженні біологічні індикатори, приготовлені наступним чином. Суспензію спор, яку ми використовували для виготовлення виробничих серій біологічних індикаторів, розводили дистильованою водою таким чином, щоб у 0,02 мл виявилося необхідне число спір, яке і вносилося до кожної пробірки Еппендорфа. Потім біологічні індикатори залишали на 24 год. при 37 про для висушування спор, після чого біологічний індикатор (пробірку Еппендорфа залишали відкритою) поміщали в спеціальний пакет фірми Wipack medical, з паперовим раннім індикатором процесу стерилізації. Після автоклавування кожен індикатор приливали 0,5 мл кольорового живильного середовища і поміщали в термостат при 55 про С на 7 днів з щоденною реєстрацією зміни кольору живильного середовища на жовтий. Якщо це траплялося, то визнавали існування життєздатних суперечок на момент закінчення автоклавування.

Легко переконатися, що кількість біологічних індикаторів, у яких вдавалося виявити життєздатні суперечки, залежало від вихідного числа індикаторів, вміщених в стерилізаційну камеру. Якщо біологічні індикатори імітують обсіменені мікроорганізмами медичні вироби, ми маємо право запідозрити, що частка біологічних індикаторів з життєздатними спорами після стерилізації може відповідати частці медичних виробів, що залишилися нестерильними. У цьому сенс застосування контролю стерилізації з допомогою біологічних індикаторів. Але їх кількість не може бути збільшена до великих чисел, принаймні до числа медичних виробів, що стерилізуються. При прийнятих у Росії нормах щодо невеликих автоклавах розміщують по 5 біологічних індикаторів, а великих — до 13 . Нам видається, що зазначеного числа біологічних індикаторів для вивчення вад стерилізації явно недостатньо, тому в наведених нижче експериментах для контролю стерилізації використовували набагато більше індикаторів.

Отже, в наших експериментах використовували не тільки більше, ніж зазвичай кількість біологічних індикаторів, але й довше спостерігали після стерилізації під час культивування в термостаті. Нарешті, ми використовували не тільки те число суперечок в індикаторі, яке рекомендовано в стандартах (10 6 суперечка), а й дещо менше (10 5), і дещо більше (10 7). У камеру стерилізації автоклава в більшості випадків крім біологічних індикаторів нічого не поміщали, щоб уникнути докорів у надмірному заповненні камери.

Дані на рис. 1, свідчать про те, що поодинокі індикатори містили життєздатні суперечки навіть після 120-хвилинного автоклавування (зрозуміло, що при використанні 5 або 10 біологічних індикаторів цей факт не був би «помічений»). У цьому досвіді використовували суперечки двох штамів Ст. stearothermophilus - ВКМ-718 (виробничий штам, що застосовується не тільки в Росії, але і в інших країнах, а також нещодавно виділений штам КК, що має підвищену термостійкість). Несподіваною виявилася та обставина, що іноді індикатори з життєздатними суперечками зустрічалися після 45 або 60 хв. автоклавування не рідше, ніж після 30-хвилинної стерилізації.

Спори В. stearothermophilus
ВК-718	КК
10 7	2,2*10 6
10 6	1,1*10 6
10 5	0,7*10 6

Рис. 1. Вплив стерилізації парою в автоклаві ВК-75 (121 o С без вакууму в стерилізаційній камері) на життєздатність суперечок В. stearothermophilus (штами ВК-718 та КК). По осі ординат - кількість біологічних індикаторів на кожну експозицію (25 біологічних індикаторів), по осі абсцис - час стерилізації (хв.). Зафарбована частина стовпчиків — кількість біологічних індикаторів із життєздатними спорами.

Розбіжність отриманих даних з очікуваними змусило нас розробити нове живильне середовище, можливості якого у прояві життєздатних суперечок у біологічних індикаторах, що пройшли стерилізацію, були набагато вищими, ніж у колишнього живильного середовища.

Поряд із колишнім живильним середовищем випробували дві нові рецептури, причому одна з них виявилася досить інформативною (рис. 2).


Рис. 2. Вплив живильного середовища на прояв життєздатності спір В. stearothermophilus в біологічних індикаторах (носії - інсулінові флакони або пробірки Еппендорфа) після стерилізації парою (121 o С - 45 хв.). n – число біологічних індикаторів у кожній експозиції, зафарбована частина стовпчиків – число біологічних індикаторів із життєздатними спорами. А - експерименти з виробничою серією 71, число суперечка в біологічному індикаторі 3,4 * 105, Б - експерименти з виробничою серією 69, число суперечка в біологічному індикаторі 106. Номери 1, 2, 3 позначені проби з різними поживними середовищами.

Таким чином, поряд з підвищеним числом біологічних індикаторів, подовженням термінів спостереження за культивованими в термостаті індикаторами, використовували не тільки прийняте живильне середовище, але і нове середовище, яке виявилося більш інформативним, ніж колишнє. Не зайве згадати, що в один пакет поміщали три біологічні індикатори з різним числом спор, пакети розміщували в стерилізаційній камері випадковим чином, після стерилізації біологічні індикатори одночасно заливали однією і тією ж серією живильного середовища і залишали в тому самому термостаті. Якщо використовували колишню і нову живильні середовища, кількість пакетів подвоювалася.

Якщо в попередніх дослідах автоклавували біологічні індикатори при 121 o С протягом 45 хв., то в досвіді, представленому на рис. 3, біологічні індикатори стерилізували пором при температурі 132 o С (обидва режими здійснювали в автоклаві вітчизняного виробництва — ВК-75).

Рис. 3. Вплив стерилізації парою при 132 o С на біологічні індикатори в залежності від вихідного числа суперечок в них (10 5 , 10 6 і 10 7 і часу автоклавування біологічних індикаторів (5, 10, 20, 40 і 60 хв.). ординат - число біологічних індикаторів у досвіді.У кожній парі стовпців зліва - результати визначення числа біологічних індикаторів з життєздатними спорами при їх культивуванні в звичайному поживному середовищі, праворуч - число біологічних індикаторів з життєздатними спорами при їх культивуванні в новому спор. число біологічних індикаторів із життєздатними спорами.

У представлених на рис. 3 даних використовували різні експозиції, у тому числі і ту (20 хв.), яка рекомендована у режимі. Можна зазначити, що за допомогою нового живильного середовища, а іноді навіть із застосуванням колишнього, вдалося виявити життєздатні суперечки в біологічних індикаторах після автоклавування протягом 20-60 хв. Більше того, складається враження, що час автоклавування у вказаних на рис. 3 межах, не дуже помітно позначилося на частці біологічних індикаторів з життєздатними суперечками.

Отримані результати аналізу біологічних індикаторів після стерилізації спонукали нас охарактеризувати режими парової стерилізації, які у Росії (рис. 4). Перші два режими здійснено в апараті ВК-75, а третій та четвертий – в апараті фірми «МММ» (Німеччина). Зрозуміло, що це стерилізаційні апарати, використані наших дослідженнях, перебували у повної технічної справності.

Рис. 4. Вплив живильного середовища на результати бактеріологічного контролю стерилізації. По осі ординат – кількість біологічних індикаторів у досвіді. Над кожною парою стовпчиків зазначено вихідне число суперечок у біологічних індикаторах. У кожній парі стовпців зліва - результати визначення числа біологічних індикаторів з життєздатними спорами при їх культивуванні у звичайному поживному середовищі, праворуч - число біологічних індикаторів з життєздатними спорами при їх культивуванні в новому поживному середовищі. Забарвлена ​​частина стовпчика – кількість біологічних індикаторів із життєздатними спорами. Режими стерилізації наведені над стовпчиками.

Легко помітити, що жоден з випробуваних режимів стерилізації не супроводжувався повним звільненням біологічних індикаторів від життєздатних суперечок Ст. Слід зазначити, що відсоток біологічних індикаторів з життєздатними спорами дещо збільшується, якщо спостереження за кольором колишнього живильного середовища в термостаті вести не 48 год., а 72 год. (Рис. 5, за даними рис. 1 для штаму ВКМ-718).

Рис. 5. Динаміка проросту біологічних індикаторів (10 5 , 10 6 , 10 7 спір в біологічних індикаторах) після автоклавування при 121 o С протягом 30, 45, 60, 90 та 120 хв. На кожну пробу брали 25 біологічних індикаторів. Врахування проросту біологічних індикаторів вели через 18, 24, 48 і 72 години їх культивування при 55 o С. Стовпчики вказують кількість біологічних індикаторів з життєздатними спорами на даний час урахування результатів.

Застосування нового живильного середовища явно прискорює після стерилізації появу максимального числа біологічних індикаторів з життєздатними спорами при культивуванні термостата при 55 o С (рис. 6).

Рис. 6. Динаміка проросту біологічних індикаторів (по 10 5 або 10 6 спір у біологічних індикаторах) після автоклавування (121 o С, 45 хв.). На кожну пробу брали 20 біологічних індикаторів. Облік проросту вели через 18, 24, 48 чи 120 год. культивування при 55 o З різних поживних середовищах.

Виявилося, що й газова стерилізація за допомогою формальдегіду (апарат фірми «МММ», Німеччина) не звільняє біологічні індикатори від життєздатних суперечок В. stearothermophilus (рис. 7).

Стерилізація формальдегідом 75 o З - 10 хв.




Рис. 7. Вплив живильного середовища на результати бактеріологічного контролю стерилізації. Позначення у верхній частині малюнка - ті самі, що і на рис. 4. У нижній частині малюнка представлено динаміку проросту біологічних індикаторів. Під стовпчиками - час культивування на добу. Позначення - ті самі, що і на рис. 5.

Проте результати стерилізації формальдегідом, принаймні при використанні колишнього живильного середовища, виглядають дещо кращими, ніж результати контролю парової стерилізації.

У наших дослідах суперечки в біологічних індикаторах висушувалися безпосередньо в пробірках Еппендорфа, у той час як в американських біологічних індикаторах (Attest) фірми «3М» суперечки висушувалися на смужках паперу і в такому вигляді вносилися в пластмасові ємності, які мають ампулу з кольоровою. Після стерилізації ампулу розбивають простим натисканням на корпус індикатора, живильне середовище виливається на папір з висушеними спорами, а потім при культивуванні в термостаті вдається зафіксувати життєздатні суперечки, якщо колір середовища змінюється жовтим. Ми виготовили деяку подобу індикатора Attest і виявили їх з колишнім і новим живильним середовищем. Виявилося, що застосування нового живильного середовища помітно покращило результати біологічного індикатора, аналогічного Attest.

Отже, в наших експериментах ми, як правило, вносили 120 біологічних індикаторів (кожен пакет із біологічними індикаторами займав об'єм близько 0,1 л) з різною вихідною концентрацією спор. Половину індикаторів досліджували з колишнім живильним середовищем, а іншу половину - з новим. У більшості випадків ті біологічні індикатори, які досліджували за допомогою нового живильного середовища, після автоклавування спочатку заповнювалися невеликим об'ємом рідини. Половина цього обсягу використовувалася для засіву на живильний агар, а до решти додавали поживне середовище. Культивування здійснювали в термостаті при 55 o З. Підростали колонії підраховували.

Ці спостереження послужили підставою для зіставлення розподілу чашок Петрі з агаром за кількістю вирослих колоній з теоретичним розподілом Пуассона (наявність чашок без колон, що виросли, дозволяло обчислити середнє значення числа колоній на одну чашку, а потім по таблицях визначити теоретичний розподіл і зіставити його з спостерігається в . Ми виходили з положення про те, що сума пуасонівських розподілів є також пуасонівський розподіл; у підрахунки включали дані щодо всіх трьох груп біологічних індикаторів (10 5 , 10 6 , 10 7). Тому в кожній групі опинилося 60 чашок Петрі.

З даних, поданих на рис. 9., слід, що з усіх вивчених режимах розподіл чашок Петрі за кількістю колоній, що виросли, відповідало розподілу Пуассона. А це, у свою чергу, говорить про те, що життєздатні суперечки, що залишилися після стерилізації, являли собою окремі незалежні один від одного сутності. Виняток склали дані щодо режиму парової стерилізації 121 o С - 45 хв., де теоретична крива істотно відхилялася від отриманої в експерименті. У цьому останньому випадку доводиться визнати, що зазначені розбіжності пов'язані з утворенням грудочок або глибокої суперечки в біологічному індикаторі, які розпадаються на окремі суперечки при розсіванні вмісту на поверхні агару. Так чи інакше, але не виникає сумніву, що після стерилізації життєздатними в біологічних індикаторах залишаються поодинокі суперечки, тоді як переважна маса суперечка гине. Принаймні така картина вимальовується при вибраній кількості біологічних індикаторів, поміщених в камеру стерилізації.

Рис. 9. Відповідність фактичних матеріалів (кількість колоній на агарі) при різних режимах парової та газової стерилізації розподілу рідкісних та випадкових подій. По осі ординат - загальна кількість біологічних індикаторів стерилізації (підсумовування результатів для трьох груп біологічних індикаторів з 105, 106 і 107 спорами). По осі абсцис - число КУО (колонієутворюючих одиниць), що виросли на агарі після посіву матеріалу біологічних індикаторів. Суцільна лінія - фактичні дані, переривчаста лінія - розрахункова лінія відповідно до розподілу випадкових та рідкісних подій (відсутність на графіку переривчастої лінії вказує на збіг розрахункових та експериментальних даних).

Одним із вражаючих уяву парадоксів є суттєве відхилення експериментальних даних від лінійної залежності логарифму числа суперечок у біологічних індикаторах від часу стерилізації. Цілком не відповідали сформованим уявленням дані про виявлення життєздатних суперечок у пізніші від початку стерилізації терміни. І вже зовсім не вкладалися у свідомість дані про більш часте виявлення життєздатних суперечок у пізніші терміни, ніж у ранні, що зазначалося в деяких експериментах. Траплялося навіть таке, коли при 15-хвилинній експозиції суперечки в біологічних індикаторах нежиттєздатні, а після 45-хвилинної експозиції в тому ж досвіді виявляються хоч і поодинокі, але життєздатні суперечки.

У цій роботі ми представляємо свою інтерпретацію процесу загибелі суперечки при стерилізації. Припущення, що наводиться тут, не має поки достатніх доказів, проте пояснює згаданий вище парадокс.

Ми припускаємо, що залежність логарифму числа суперечок у біологічних індикаторах від часу стерилізації носить не лінійний, а хвилеподібний характер. За даними рис. 1 ми дали свою інтерпретацію залежності логарифму числа суперечка від часу стерилізації, скориставшись тими середніми величинами числа суперечок в біологічних індикаторах, які були обчислені за допомогою розподілу Пуассона (рис. 11, 12). Але спочатку ми уявляємо залежність зони визначення середніх величин від числа біологічних індикаторів (рис. 10).

Рис. 10. Область застосування розподілу Пуассона для визначення середніх значень (m) при різних числах біологічних індикаторів у групі (числа в середині малюнка).

Рис. 11. Вплив стерилізації парою в автоклаві ВК-75 (121 o З без вакууму в стерилізаційній камері) на життєздатність спір В. stearothermophilus, штам ВК-718. Хвилясті криві - інтерпретація фактичних даних. По осі ординат - десятковий логарифм середньої концентрації спор в біологічному індикаторі, по осі абсцис - час стерилізації (хв.). Горизонтальні прямі обмежують сферу застосування розподілу Пуассона для визначення середніх значень.

Рис. 12. Вплив стерилізації парою в автоклаві ВК-75 (121 o З без вакууму в стерилізаційній камері) на життєздатність спір В. stearothermophilus, штам КК. Хвилясті криві - інтерпретація фактичних даних. По осі ординат - десятковий логарифм середньої концентрації спор в біологічному індикаторі, по осі абсцис - час стерилізації (хв.). Горизонтальні прямі обмежують сферу застосування розподілу Пуассона для визначення середніх значень.

Для визначення середньої величини необхідно мати біологічні індикатори без життєздатних суперечок, а для позначення меж зони значень середніх потрібно, щоб хоча б один біологічний індикатор містив життєздатні суперечки, або, навпаки, щоб хоча б один біологічний індикатор виявився без життєздатних суперечок. Зі зіставлення різних зон можна зробити висновок, що зі збільшенням числа біологічних індикаторів найбільше збільшуються можливості нижньої зони, тоді як верхня її частина розширюється незначно. Розподіл Пуассона табульований, а використання вищесказаного дозволяє розрахувати необхідну кількість біологічних індикаторів, що дозволяє сподіватися на виявлення значно більшої кількості життєздатних суперечок після стерилізації.

Подання фактичних даних за допомогою хвилеподібних кривих дозволяє зрозуміти, чому в деяких експериментах настільки химерно вишиковуються на графіках біологічні індикатори з життєздатними спорами. Адже вибір точок на осі часу носить випадковий характер, не пов'язаний із закономірностями загибелі суперечка, яка не враховує гаданого хвилеподібного характеру. Більше того, цілком може статися, що нижня. частина хвилі в районі 15 хв. може виявитися за межами можливості виявлення в біологічних індикаторах (при обраній їх кількості) життєздатних суперечок, у той час як при більш тривалій експозиції вибір часової точки збігся з верхньою частиною хвилі та дозволив виявити біологічні індикатори з життєздатними спорами.

Ми вважаємо, що залежність між логарифмом числа суперечка в біологічному індикаторі від часу стерилізації відображає затухаючий хвилеподібний автоколивальний процес, пов'язаний з тим, що не тільки суперечки, а й умови, що їх оточують, визначають результат стерилізації.

У наведеній нижче таблиці зібрані результати контролю різних видівстерилізації за допомогою біологічних індикаторів в апаратах, що використовуються в практичних лікувальних закладах за тими режимами, що передбачені існуючими стандартами. Ми використовували повний цикл стерилізації, значну кількість біологічних індикаторів, тривале їх культивування після стерилізації, колишнє та нове живильні середовища.

Зведена таблиця результатів біологічного контролю стерилізації

№ п/п	Стерилізаційний апарат				Стерилізація		Біологічні індикатори
	найменування	фірма- виробник, країна	рік випуску	Об `єм стерили- національною камери	вигляд	режим	тест- культура	число суперечка	число індика- торів в стерилізація.	% с життєспо- особистими суперечками після стерилізація.
										звичайна живлять. середа	нова живлять. середа
1.	ГК-100-ЗМ	Тюменський з-д медобладнання, Росія	1993	100 л	Парова	121 o З, 45 хв.	В. stearo- themophilus	10 6	40	0	10
2.	«	«	«	«	«	«	«	«	40	10	25
3.	BK-75	«	«	75 л	«	«	«	3*10 5	120	20	45
4.	«	«	«	«	«	«	«	10 6	60	25	65
5.	«	«	«	«	«	«	«	10 5	80	25	75
								10 6	80	3	100
								10 7	80	13	100
6.	«	«	«	«	«	«	«	10 5	75	0	7
								10 6	75	0	8
								10 7	75	20	20
7.	«	«	«	«	«	«	«	10 5	75	0	12
								10 6	75	0	13
								10 7	75	20	22
8.	ГК-100-ЗМ	«	«	100 л	«	«	«	10 5	40	15	20
								10 6	40	0	15
								10 7	40	0	35
9.	BK-75	«	1992	75 л	«	121 o З, 45 хв.	«	10 5	40	0	5
								10 6	40	0	25
								10 7	40	0	25
10.	«	«	«	«	«	«	«	10 6	40	20	50
								10 7	40	5	60
11.	BK-75	«	1992	75 л	Парова	121 o З, 45 хв.	В. stearo- themophilus	10 5	40	30	95
								10 6	40	50	90
								10 7	40	15	100
12.	«	«	«	«	«	«	«	10 4	40	35	75
								10 6	40	25	35
								10 7	40	50	40
13.	ГК-100-3М**)	«	1988	100 л	«	«	«	10 5	40	10	10
								10 6	40	10	10
								10 7	40	10	15
14.	ГК-100-3М**)	«	«	«	«	«	«	10 5	40	5	0
								10 6	40	0	10
								10 7	40	5	0
15.	ГКД-560	«ЛАД», Росія	1996	560 л	«	120 o З, 20 хвилин.		10 5	40	10	5
								10 6	40	55	10
								10 7	40	65	55
16.	Секурокс	"МММ", Німеччина	1993	0,5 м 3	«	«	«	10 5	40	15	30
								10 6	40	20	45
17.	«	«	«	«	«	«	«	10 5	40	25	70
								10 6	40	10	75
18.	«	«	«	«	«	«	«	10 5	40	10	80
								10 6	40	0	80
								10 7	40	10	75
19.	Castle м/с 3622	USA	1997	680 л	«	«	«	10 5	40	0	0
								10 6	40	0	5
								10 6*)	0	0	—
								10 7	40	0	0
20.	Селектомак	"МММ", Німеччина	1993	100 л	Парова	«	«	10 5	40	0	0
								10 6	40	0	10
								10 7	40	5	20
21.	ГК-100-3М**)	Тюм. з-д медооор., Росія	1993	100 л	«	132 o З, 20 хвилин.	«	10 5	40	0	0
								10 6	40	0	5
								10 7	40	10	0
22.	ВК-75	«	1992	75 л	«	«	«	10 5	40	5	40
								10 6	40	5	60
								10 7	40	5	75
23.	Селектомак	"МММ", Німеччина	1993	100 л	Парова	134 o З, 5 хв.	В. stearo- themophilus	10 5	40	0	0
								10 6	40	0	20
								10 7	40	5	10
24.	ГКД-560	«ЛАД», Росія	1996	560 л	Парова	134 o З, 5 хв.	«	10 5	40	45	25
								10 6	40	50	35
								10 7	40	35	100
25.	Секурекс	"МММ", Німеччина	1993	500 л	«	«	«	10 5	40	20	55
								10 6	40	20	45
								10 7	40	10	70
26.	Castle м/с 3622	USA	1997	680 л	«	134 o З, 10 хвилин.	«	10 5	40	0	0
								10 6	40	0	20
								10 6*)	20	0	—
								10 7	40	20	25
27.	«	«	«	«	«	«	«	10 5	40	0	25
								10 6	40	5	15
								10 7	40	5	30
28.	Комбімак	"МММ", Німеччина	1993	70 л	Газова (формаль- дегід)	75 o C, 10 хвилин.	«	10 5	40	5	20
								10 6	40	10	45
								10 7	40	5	20

Примітка:*) - Для контролю застосували біологічні індикатори Biosign фірми Castle, що містять фірмове живильне середовище.
**) — Напередодні випробувань поставлено нову камеру стерилізації.

Найбільш загальним ознакою результатів контролю стерилізації і те, що вдалося переконатися у стерильності всіх біологічних індикаторів по закінченні часу стерилизации. Таким чином, цей найважливіший контроль свідчить про неефективність у прийнятому значенні стерилізації, причому найбільш надійної парової стерилізації. Так як доза 10 7 спір в біологічному індикаторі може бути визнана надмірно високою, доцільно розглянути окремо результати контролю стерилізації біологічними індикаторами, що містили 10 5 і 10 6 спор. При використанні нового живильного середовища якась частина біологічних індикаторів після стерилізації у всіх випадках містила життєздатні суперечки. Якщо ж використовували колишнє живильне середовище, то у трьох випадках при контролі апарату ВК-75 (30%) біологічні індикатори не містили життєздатну суперечку. Найчастіше подібні результати відзначені при контролі апаратів зарубіжного виробництва, і це може бути деякою вказівкою на якісну перевагу над російськими автоклавами.

Причини ситуації, що склалася, неясні, як і можливі пропозиції щодо вдосконалення стерилізації. Що стосується застосування паперових індикаторів стерилізації, то навряд чи слід розраховувати на більше, ніж контроль стану деяких технічних характеристикстерилізаційного апарату, особливо на початку процесу. Повна довіра до показань паперових індикаторів може сприяти помилковому висновку про ефективну стерилізацію.

Досі йшлося про долю біологічних індикаторів у процесі стерилізації, що може не завжди відображати особливості реальної стерилізації медичних виробів. Для стерилізації в якості «медичних виробів» брали відрізки трубочок з полівінілхлориду довжиною в 1 см, після ретельного промивання їх обсіменяли спорами Ст. stearothermophilus в об'ємі 0,02 мл, висушували і піддавали передстерилізаційному очищенню кип'ятінням1 в2. . Після відмивання в стерильній дистильованій воді відрізки трубочок наступного дня стерилізували в пакетах (121 o С - 45 хв.), Після чого кожен відрізок поміщали в стерильну пробірку Епендорфа і заливали живильним середовищем. Культивування відрізків проводили в термостаті при 55 o С. Контрольні відрізки обсіменяли спорами, але не піддавали передстерилізаційної обробки. Іншими словами, у цьому досвіді наслідували експерименти з біологічними індикаторами.

Отримані результати вражають своєю несподіванкою - відрізки трубочок, оброблені розчином соди при 100 o С, виявилися після стерилізації настільки ж обсіменені, що і не піддавалися попередньому очищенню, яка в даний час займає важливе місце в методиці стерилізації.

Рис. 13. Результати стерилізації відрізків трубки з полівінілхлориду після їх передстерилізаційної очистки і без неї. У кожній парі стовпчиків зліва — число відрізків трубки з життєздатними спорами при культивуванні зі звичайним живильним середовищем, праворуч — з новим живильним середовищем. Цифри над стовпчиками - число суперечок В. stearothermophilus, нанесених спочатку на внутрішню поверхнювідрізків трубки.

В іншому досвіді відрізки трубочок з силіконової гуми розміром в 1 см після ретельного промивання в дистильованій воді обсіменяли спорами Ст Stearothermophilus, потім залишали на 1 годину при кімнатній температурі. Після закінчення зазначеного часу дослідні відрізки на 30 хв. занурювали в 0,2% розчин дезінфікуючого засобу "Септабік", відрізки ретельно промивали в дистильованій воді, просушували на фільтрувальному папері. Контрольні відрізки обсіменяли спорами, але не обробляли засобом "Септабік". На наступний день усі відрізки закладали в пакети і стерилізували в автоклаві (121 o С - 45 хв.), Після чого кожен відрізок поміщали в пробірку Еппендорфа, заливали живильним середовищем і культивували при 55 o С.

У досвіді (рис. 14) результати випробувань були дещо кращими, ніж у попередньому, оскільки спостерігалася все ж таки різниця в частці пророслих дослідних і контрольних відрізків трубочок з силіконової гуми, проте ці відмінності не були вражаючими. У всякому разі, навіть після передстерилізаційного очищення стерилізація макетів медичних виробів виявилася неефективною. І це незважаючи на те, що обробляти невеликі відрізки трубочок набагато легше, ніж великі та складні вироби, де можливі місця обсіменіння мікроорганізмами менш доступні для розчинів, що дезінфікують.

Рис. 14. Результати стерилізації відрізків силіконової трубки після їх передстерилізаційного очищення та без неї. У кожній парі стовпчиків зліва — число відрізків трубки з життєздатними спорами при культивуванні зі звичайним живильним середовищем, праворуч — з новим живильним середовищем. Числа над стовпчиками - число суперечок В. stearothermophilus, нанесених спочатку на внутрішню поверхню відрізків трубки.

Зважаючи на незвичайність отриманих результатів, необхідно переконатися в тому, що не були допущені технічні похибки. Протягом усього часу досліджень і приміщеннях і в ламінарному боксі розставлялися чашки з живильним агаром, але жодного разу бактерії В. stearothermophilus виділені не були, як і не були виділені з живильного середовища та інших використаних інгредієнтів (у кожному досвіді робили посіви живильного середовища та дистильований). води на 10 агарових чашок та 10 пробірок Епендорфа з живильним середовищем, але безрезультатно). Припущення про те, що кількість бактерій у біологічних індикаторах зростає під час висушування, не підтвердилося (відомо, що В. stearothermophilus не розмножується при 37 o С).

Таким чином отримані результати є невтішними, але все ж таки, принаймні, для деяких авторів очікуваними. З усієї величезної маси літератури з термоінактивації спорових бактерій, у тому числі фундаментальних досліджень, найближче до нашого трактування стоїть монографія Мунблітн, Тальрозе і Трофімова, які експериментів не ставили і користувалися лише даними літератури. Ці автори, які дотримуються пояснення термоінактивації суперечок за рахунок термоушкоджень життєво важливих білків та сублетальних ушкоджень мембрани, висловили побоювання щодо ефективності стерилізації: «…стандартні умови теплового впливу(120 o З, 30 хв.) у деяких випадках не забезпечують високої надійності стерилізації», «…існує принципова небезпека відновлення та розмноження в організмі людини мікроорганізмів, які були визнані загиблими». За нашими даними навіть такі облігатні та непатогенні термофіли як В. stearothermophilus здатні до обмеженого розмноження при 37 o С, якщо до живильного середовища додати кров людини.

Не лише біологічні індикатори зрідка містили життєздатні суперечки після стерилізації, а й макети обсіменених спорами медичних виробів. Більше того, передстерилізаційна обробка макетів розчином окропу або 0,2% розчину препарату «Септабік» не супроводжувалася достатнім ефектом — стерилізація була неефективною.

Тепер завдання полягає в розробці нових методів, які зможуть гарантувати ефективність стерилізації. Наше уявлення про кінетику стерилізаційного процесу дозволили апробувати нові методичні пропозиції, які виявилися перспективними, але потребують різнобічної перевірки.

Висновки

1. Розподіл рідкісних і випадкових подій дозволяє розраховувати середнє число суперечок на один біологічний індикатор для умов, коли кількість життєздатних суперечок мало і трапляються вони далеко не в кожному індикаторі.

2. Є достатньо підстав, щоб засумніватися в лінійному характері залежності між логарифмом числа суперечок у біологічних індикаторах та часом від початку стерилізації. Життєздатні суперечки були виявлені в біологічних індикаторах навіть через 1-2 години перебування в автоклаві за регламентованої температури.

3. В експериментах з контролю парової стерилізації застосовували значну кількість біологічних індикаторів, високоефективне кольорове живильне середовище і тижневий термін культивування в термостаті, що в кінцевому підсумку дозволило виявляти життєздатні суперечки в біологічних індикаторах після стерилізації частіше, ніж зазвичай і практично в більшості випадків. .

4. При висівах вмісту біологічних індикаторів після стерилізації на щільне живильне середовище в ряді випадків виявлялися поодинокі колонії В. stearothermophilus, причому в більшості випадків розподіл агарових чашок Петрі за кількістю колоній в точності відповідало розподілу від друга і розташовані ізольовано та випадково.

5. У деяких експериментах відсоток біологічних індикаторів із життєздатними спорами після тривалих термінів стерилізації перевищував такий після коротких термінів стерилізації, що не знаходило задовільного пояснення. Ми припустили хвилеподібний характер залежності логарифму числа життєздатних суперечок у біологічних індикаторах від часу стерилізації.

6. Контроль стерилізаторів, встановлених у практичних лікувальних закладах, показав, що у всіх випадках та чи інша частина біологічних індикаторів містила життєздатні суперечки після стерилізації, а ймовірність незадовільних результатів аналізу індикаторів виявилася набагато вищою за ту, яка рекомендована в стандартах.

7. Експериментальна парова стерилізація відрізків трубочок із синтетичних матеріалів, обсіменених спорами, після передстерилізаційного очищення закінчилася виявленням життєздатних суперечок у більш ніж половини екземплярів, тобто результатами, аналогічними тим, які були отримані з біологічними індикаторами.

8. Число життєздатних суперечок у біологічному індикаторі після стерилізації є імовірнісною величиною, а їх виявлення, крім іншого, залежить від числа індикаторів у стерилізаційній камері.

Література

1. Абрамова І.М. Нові розробки у сфері стерилізації виробів медичного призначення. Дезінфекційна справа, 1998 №3, с. 25.
2. Більшов А.М., Смирнов Н.В. Таблиці математичної статистики. М., 1965.
3. Вашков В.І. Антимікробні засоби та методи дезінфекції при інфекційних захворюваннях. М., 1977.
4. Гутерман Р.Л. Засоби контролю термічної стерилізації виробів медичного призначення Дис. канд. мед. наук. М., 1993.
5. Кашнер Д. Життя бактерій в екстремальних умовах. М., 1981.
6. Леві М.І., Безсонова В.Я., Лівшиць М.М. Застосування кольорових живильних середовищ у процесі контролю стерилізації. Клінічна лабораторна діагностика, 1993 № 2, с. 65-67.
7. Леві М.І. Аналіз несприятливих результатів парової та повітряної стерилізації. Дезінфекційна справа, 1996 № 4, с. 58-63.
8. Леві М.І. Значення контролю стерилізації за допомогою паперових індикаторів та біотестів. Дезінфекційна справа, 1997 № 3, с. 24-28.
9. Леві М.І., Сучков Ю.Г., Рубан Г.І., Міщенко А.В. Нові форми бактеріальних тестів контролю різних режимів стерилизации. Саме там, с. 29-33.
10. Леві М.І., Сучков Ю.Г., Лівшиць М.М. Оптимізація біотестів для контролю парової стерилізації. Дезінфекційна справа, 1998 № 2, с. 30-33.
11. Леві М.І. Чисельне визначення величини D, стерилізаційного часу та вибір контрольних біотестів. Саме там, с. 34-42.
12. Методичні вказівкиз контролю парових та повітряних стерилізаторів. МОЗ СРСР, від 28.02.91 № 15/6-5.
13. Мунбліт В.Я., Тальроз В.Л., Трофімов В.І. Термоїнактивація мікроорганізмів. М., 1985.
14. За ред. Озерецьківського Н.А. та Останіна Г.І. Бактерійні та вірусні лікувально-профілактичні препарати. Алергені. Дезінфекційно-стерилізаційні режими поліклінік. З.-Петербург, 1998.
15. Сучков Ю.Г., Леві М.І., Безсонова В.Я. Новий термофільний штам для бактеріологічного контролю парової стерилізації (повідомлення 1), Дезінфекційна справа, 1996 № 3, с. 28-33.
16. Biological systems for testing sterilizers — Part 1: General requirements. European standard, Draft pr EN 866-1.1995.
17. Farrell J., Rose A.N. Temperature effect на microorganisms. In: "Thermobiology", p. 147-218. Acad. press, London-New-York, 1967.
18. Graham G.S. p align="justify"> Biological indicators for hospital and industrial sterilization, p. 54-72. In: "Sterilization of medical product". Джонсон і Джонсон. Москва, 1991.
19. Greene V.W. Principles and practice of disinfection, preservation and sterilization. Oxford, 1982.
20. International standard ISO/DIS 14161. Sterilization of health care products — guidence for the selection, use and interpretation of results. 1998.
21. McCormick PJ, Scoville JR. - Патент USA № 4.743.537, 1988 р.
22. Medical devices - Estimation of the population of microorganisms on product. Part 2 guidence, pr EN 1174-2.1994
23. Russel A.D. Destruction bacterial spores. Acad. press, London-New-York, 1982.
24. Russel A.D. Fundamental aspects microbial resistance до хімічних і фізичних agents. In: "Sterilization of medical product", v. V, p. 22-42. Johnson та Johnson, 1991.
25. Sussman A., Halvorson H. Spores, їх dormancy і germinatiom. New-York-London, 1967.
26. Wicks JH, Foltz W.E. Європейський патент № 0414.968 A1, 1991
27. Журавльова В.І., Великодворська З.Ф. Оцінка живильних середовищ для культивування тест-мікроорганізмів, які використовуються під час контролю ефективності стерилізації в автоклавах. Лабораторна справа, 1988 № 11, с. 63-64.
28. Калініна Н.М., Шилова С.В., Мотіна Г.Л., Чайковська С.М. Вивчення термостійкості спор культури Вас. Stearothermophilus, що використовується для приготування біоіндикаторів. Антибіотики, 1982 № 2, с. 117-120.
29. Калініна Н.М., Мотіна ГЛ., Чайковська С.М., Шилова С.В. Приготування біоіндикаторів контролю ефективності процесів стерилізації. Антибіотики, 1983 № 10, с. 600-603.

МІНІСТЕРСТВО ОХОРОНИ ЗДОРОВ'Я РОСІЙСЬКОЇ ФЕДЕРАЦІЇ

ЗАГАЛЬНА ФАРМАКОПЕЙНА СТАТТЯ

СтерилізаціяОФС.1.1.0016.15

Натомість ст. ГФXI, Вип.2

Ця загальна фармакопейна стаття встановлює методи та умови стерилізації, які використовуються при отриманні стерильних лікарських засобів.

Під стерильністю розуміють відсутність життєздатних мікроорганізмів та його суперечка.

Стерилізація – це процес, що валідується, що використовується при отриманні стерильних лікарських форм для звільнення продукту, обладнання, допоміжних речовин і упаковки від живих мікроорганізмів та їх суперечка.

При зміні умов стерилізації, у тому числі зміні обсягу завантаження стерилізатора, необхідно проводити повторну валідацію.

Методи, описані нижче, застосовуються для інактивації бактерій, дріжджових та пліснявих грибів.

По можливості продукцію стерилізують у кінцевій упаковці (фінішна стерилізація).

У випадках, коли фінішна стерилізація неможлива, використовують метод мембранної фільтрації або отримання лікарських препаратівв асептичних умовах без подальшої стерилізації кінцевого препарату. Додатково можна проводити обробку об'єкта (наприклад, стерилізація гамма-випромінюванням) у кінцевій упаковці. У всіх випадках упаковка та закупорювальні засоби повинні забезпечувати стерильність препарату протягом усього терміну придатності.

РІВЕНЬ ЗАБЕЗПЕЧЕННЯ СТЕРИЛЬНОСТІ

Для методів, описаних нижче, у разі потреби вказують рівень забезпечення стерильності (УОС).

Рівень забезпечення стерильності процесу стерилізації – це рівень гарантії, з якою процес забезпечує стерильність всіх одиниць продукції серії. Для конкретного процесу рівень забезпечення стерильності визначається як можливість наявності нестерильної одиниці в серії. Наприклад, УОС = 10 −6 означає, що у підданої стерилізації серії готового продукту обсягом 10 6 одиниць існує ймовірність наявності трохи більше життєздатного мікроорганізму. Рівень забезпечення стерильності процесу стерилізації конкретного продукту встановлюють у процесі валідації.

МЕТОДИ ТА УМОВИ СТЕРИЛІЗАЦІЇ

Стерилізація може бути проведена одним із таких методів або їх комбінацією.

1. Термічні методи:

• насиченою водяною парою під тиском (автоклавування);
• гарячим повітрям (повітряна стерилізація).

1. Хімічні методи:

• газами;
• розчинами антисептиків.

1. Стерилізація фільтруванням (через фільтри з необхідним розміром пор).
2. Радіаційний метод стерилізації.

Використання модифікації або комбінації цих методів допускається за умови проведення валідації обраного процесу стерилізації, щоб забезпечити як ефективність процесу, так і цілісність продукту, упаковки та закупорювальних засобів.

Для всіх методів стерилізації, у тому числі під час використання стандартних умов, для підтвердження забезпечення необхідних умовстерилізації всієї серії продукту протягом усього процесу стерилізації проводять моніторинг на критичних стадіях виробництва.

Термічна стерилізація

Стерилізація насиченою парою під тиском (автоклавування)

Стерилізацію насиченою парою здійснюють при температурі
120 - 122 ° С під тиском 120 кПа і при температурі 130 - 132 ° С під тиском 200 кПа. Цей метод найчастіше застосовують для водних розчинів та інших рідких лікарських форм у герметично закупорених, попередньо простерилізованих флаконах, ампулах або інших видах упаковки. Стерилізацію проводять у парових стерилізаторах (автоклавах). Стандартними умовами є нагрівання за температури 120 – 122 °С протягом 8–15 хв. Час стерилізації залежить від фізико-хімічних властивостей та обсягу продукту, а також обладнання, що використовується (табл. 1).

Таблиця 1 - Час стерилізації для різного об'єму розчину

Жири та олії стерилізують при температурі 120 – 122 °С протягом 2 год.

Вироби зі скла, фарфору, металу, перев'язувальні та допоміжні матеріали, при необхідності санітарний технологічний одяг, стерилізують при температурі 120 – 122 °С – протягом 45 хв.
130 - 132 ° С - протягом 20 хв. Для стерилізації виробів із гуми слід використовувати перший із зазначених режимів.

Допускаються інші поєднання часу та температури, якщо попередньо доведено, що вибраний режим стерилізації забезпечує необхідний та відтворюваний рівень загибелі мікроорганізмів. Використані процедури повинні забезпечувати рівень забезпечення стерильності не більше 10-6.

Автоклав завантажують таким чином, щоб забезпечити однорідність температури в межах всього завантаження. У процесі автоклавування слід реєструвати умови процесу стерилізації (температуру, тиск та час). Температуру, як правило, вимірюють за допомогою термочутливих елементів, поміщених у контрольні упаковки, разом з додатковими термоелементами, поміщеними в низькотемпературні місця стерилізаційної камери, які встановлюються заздалегідь. Умови кожного циклу стерилізації реєструються, наприклад, у вигляді температурно-часової діаграми або іншим відповідним способом.

Для оцінки ефективності кожного циклу стерилізації можливе використання як хімічних (термінових), так і біологічних індикаторів.

Стерилізація гарячим повітрям (повітряна стерилізація)

Для цього методу термічної стерилізації стандартними умовами є нагрівання при температурі не менше 160 ° С протягом не менше
2 год.

Для стерилізації термостійких порошкоподібних речовин (натрію хлориду, цинку оксиду, тальку, білої глини та ін.) або мінеральних і рослинних олій, жирів, ланоліну, вазеліну, воску та ін. температуру і час стерилізації встановлюють залежно від маси зразка (табл. 2 та 3).

Таблиця 2 - Умови стерилізації для термостійких порошкоподібних речовин

Таблиця 3 - Умови стерилізації для мінеральних та рослинних олій, жирів, ланоліну, вазеліну, воску та ін.

Вироби зі скла, металу, порцеляни, установки для стерилізуючого фільтрування з фільтрами та приймачі фільтрату стерилізують при температурі 180 °С протягом 60 хв, або при температурі 160 °С – протягом 2,5 год.

Повітряну стерилізацію при температурі понад 220 °З зазвичай застосовують для стерилізації та депірогенізації скляної упаковки. У цьому випадку має бути доведено зменшення на 3 порядки кількості термостійких ендотоксинів замість використання біологічних індикаторів.

Допускається використання поєднань часу і температури, якщо попередньо доведено, що обраний режим стерилізації забезпечує необхідний рівень загибелі мікроорганізмів. Використані процедури повинні забезпечувати рівень забезпечення стерильності не більше 10-6.

Повітряну стерилізацію проводять у спеціальній сухожаровій шафі з примусовою циркуляцією стерильного повітря або на іншому устаткуванні, спеціально призначеному для цих цілей. Стерилізаційну шафу завантажують таким чином, щоб забезпечити однорідність температури в межах всього завантаження. Температуру в стерилізаційній шафі, як правило, вимірюють за допомогою термочутливих елементів, поміщених у контрольні упаковки, разом з додатковими термоелементами, поміщеними в низькотемпературні місця стерилізаційної шафи, які встановлюються заздалегідь. У ході кожного циклу стерилізації реєструють температуру та час. Для оцінки ефективності кожного циклу стерилізації можливе використання як хімічних (термінових), так і біологічних індикаторів.

Хімічна стерилізація

Хімічну стерилізацію проводять газом чи розчинами.

Газова стерилізація

Стерилізація газом застосовується лише у разі, якщо не можуть бути використані інші методи. При цьому способі стерилізації повинно бути забезпечене проникнення газу і вологи в продукт, що стерилізується, а також подальша дегазація і видалення продуктів його розкладання в продукті, що стерилізується, до рівня, що не викликає токсичного ефекту при застосуванні лікарського засобу.

Стерилізацію газом проводять у газових стерилізаторах або мікроанаеростатах (портативний апарат), обладнаних системою подачі газу та постстерилізаційної дегазації. Як газ зазвичай використовують оксид етилену. У зв'язку з його високою пожежонебезпечністю допускається його змішування з будь-яким інертним газом.

Стерилізацію газом проводять за наступних режимів:

• – оксид етилену: стерилізуюча доза 1200 мг/дм 3 температура не менше
  18 ° С, відносна вологість 80%, час витримки - 16 год (портативний апарат);
• – суміш оксиду етилену та бромистого метилу (1:2,5):

а) стерилізуюча доза 2000 мг/дм 3 температура 55 ° С, відносна вологість 80%, час витримки 4 год;

б) стерилізуюча доза 2000 мг/дм 3 температура не менше 18 ° С, відносна вологість 80%, час витримки 16 год.

Допускається використання інших валідованих режимів газової стерилізації, що забезпечують стерильність та збереження об'єкта.

Оксид етилену може виявляти мутагенні властивості та токсичність, особливо при використанні матеріалів, що містять іони хлору. У зв'язку з токсичністю оксиду етилену та бромистого метилу застосування стерилізованих цими газами виробів допускається тільки після їх дегазації, тобто витримки у приміщенні, що вентилюється, до допустимих залишкових кількостей, зазначених у нормативній документації.

Умови дегазації залежать від призначення, способу застосування, розмірів виробів, матеріалу виробу та упаковки та зазначаються у нормативно-технічній документації на виріб.

По можливості в процесі стерилізації реєструють такі показники: концентрацію газу, відносну вологість, температуру та час стерилізації. Вимірювання проводять у тих зонах, де умови стерилізації досягаються найгірше, що встановлюють у процесі валідації.

Вироби, що стерилізуються, упаковують у пакети з поліетиленової плівки товщиною від 0,06 до 0,20 мм, пергаменту та ін. Метод рекомендований для виробів з гуми, полімерних матеріалів, скла, металу.

Ефективність процесу газової стерилізації перевіряють при кожному завантаженні за допомогою біологічних індикаторів.

Перед випуском кожної серії перевіряють стерильність на певній кількості зразків.

Хімічна стерилізація розчинами

Хімічну стерилізацію проводять розчинами антисептиків (водню пероксид та надкислоти). Ефективність стерилізації розчинами антисептиків залежить від концентрації активної речовини, часу стерилізації і температури стерилізуючого розчину.

При стерилізації 6 % розчином водню пероксиду температура розчину, що стерилізує, повинна бути не менше 18 °С, час стерилізації – 6 год; при температурі 50 ° С – 3 год.

При стерилізації 1% розчином дезоксону-1 (за надоцтовою кислотою) температура розчину, що стерилізує, повинна бути не менше 18 °С, час стерилізації 45 хв.

Хімічну стерилізацію розчинами антисептиків проводять у закритих ємностях зі скла, пластмаси або ємностях, покритих непошкодженою емаллю, при повному зануренні виробу розчин на час стерилізації. Після цього виріб промивають стерильною водою асептичних умовах.

Метод стерилізації розчинами антисептиків застосовують для виробів із полімерних матеріалів, гуми, скла, корозійностійких металів.

Стерилізація фільтруванням

Деякі діючі речовини та лікарські препарати, які не можуть бути піддані фінішній стерилізації жодним з описаних вище методів, можуть бути простерилізовані з використанням мембранних фільтрів. Такі продукти вимагають дотримання спеціальних запобіжних заходів. Виробничий процес та виробниче середовище повинні забезпечувати мінімальний ризик мікробного забруднення та вимагають регулярного моніторингу. Обладнання, упаковка, закупорювальні засоби та, по можливості, інгредієнти слід піддавати відповідній стерилізації. Рекомендується проводити фільтрацію безпосередньо перед заповненням упаковки. Операції, що йдуть за фільтрацією, проводять в асептичних умовах.

Попередню фільтрацію здійснюють через мембранні фільтри з розміром пір не більше 0,45 мкм. Потім розчини пропускають через мембранні фільтри з номінальним розміром доби не більше 0,22 мкм, здатні затримувати не менше 10 7 мікроорганізмів Pseudomonas diminutaна квадратний сантиметр поверхні. Допускається використання інших типів фільтрів, що забезпечують таку саму ефективність фільтрації.

Придатність мембранних фільтрів встановлюють шляхом мікробіологічних випробувань з використанням відповідних мікроорганізмів, наприклад, Pseudomonas diminuta(ATCC 19146, NCIMB 11091 чи CIP 103020). Рекомендується використовувати не менше 10 7 КУО/см 2 активної поверхні фільтра. Суспензія мікроорганізмів повинна бути приготовлена ​​в триптонно-соєвому бульйоні, який після проходження через фільтр збирають асептично та інкубують в аеробних умовах за температури не більше 32 °С.

Рівень фільтрації визначають як величину логарифму зниження (ВЛЗ) мікробної забрудненості. Наприклад, якщо при фільтрації через мембранний фільтр з розміром пір 0,22 мкм затримується 107 мікроорганізмів, ВЛЗ становить не менше 7.

Слід враховувати рівень мікробної контамінації до початку фільтрації, пропускну здатність фільтра, об'єм серії продукту, тривалість фільтрації, а також уникати забруднень продукту мікроорганізмами з фільтру. Термін використання фільтра не повинен перевищувати часу, встановленого при валідації даного фільтра у поєднанні з конкретним продуктом, що фільтрується. Не слід повторно використовувати мембранні фільтри.

Цілісність готового до застосування мембранного фільтра перевіряють до і після фільтрації шляхом випробувань, відповідних типу фільтра та стадії перевірки, наприклад, випробуванням на визначення насиченості (точка бульбашки) методом дифузійного потоку або витримкою під тиском.

У зв'язку з тим, що при проведенні стерилізації фільтруванням існує більший потенційний ризик, порівняно з іншими методами стерилізації, рекомендується проводити попередню фільтрацію через мембранні фільтри в тих випадках, коли низький рівень мікробної контамінації не може бути забезпечений іншими засобами.

Отримання лікарських засобів в асептичних умовахбез подальшої стерилізації кінцевого продукту

Метою одержання лікарських препаратів в асептичних умовах без подальшої стерилізації кінцевого продукту є збереження стерильності препарату з використанням компонентів, кожен із яких був попередньо простерилізований одним із вищеописаних методів. Це досягається шляхом проведення процесу у приміщеннях певного класу чистоти, а також використання умов та обладнання, що забезпечують стерильність.

В асептичних умовах можуть здійснюватися: процес наповнення упаковки, закупорювання, асептичне змішування інгредієнтів з наступним асептичним наповненням та закупорюванням. Для збереження стерильності інгредієнтів та готового продукту під час виробничого процесу особливу увагу слід приділяти:

• - Станом виробничого середовища;
• - персоналу;
• – критичним поверхням;
• – стерилізації упаковки та закупорювальних засобів та передавальним процедурам;
• – гранично допустимий час зберігання продукту до моменту наповнення кінцевої упаковки.

Валідація процесу включає належну перевірку всіх перерахованих вище пунктів, а також систематичний контроль із застосуванням імітаційних тестів з використанням живильного середовища, яке інкубують та досліджують на наявність мікробної контамінації (тести на заповнення живильними середовищами). Перед випуском кожної серії продукту, що простерилізується фільтруванням та/або виготовленого в асептичних умовах, слід проводити випробування стерильності на відповідній кількості зразків.

Радіаційний метод стерилізації

Радіаційний метод стерилізації здійснюють шляхом опромінення продукту іонізуючим випромінюванням. Даний метод може бути використаний для стерилізації лікарської рослинної сировини, лікарських рослинних препаратів, лікарських засобів рослинного походженнята ін.

γ-випромінювання, джерелом якого може бути радіоізотопний елемент (наприклад, кобальт-60), або пучок електронів, що подається відповідним прискорювачем електронів.

Для цього методу стерилізації дозу поглинання встановлюють від
10 до 50 кГр. Допускається використання інших доз, якщо попередньо доведено, що вибраний режим забезпечує необхідний рівень летальності мікроорганізмів. Використані процедури та запобіжні заходи повинні забезпечувати рівень забезпечення стерильності не більше 10 -6 .

Перевагою радіаційної стерилізації є її низька хімічна активність та легко контрольована доза випромінювання, яка може бути точно виміряна. Радіаційна стерилізація проходить за мінімальної температури, проте можуть бути обмеження при використанні деяких типів скляної та пластикової упаковки.

У процесі радіаційної стерилізації слід постійно здійснювати моніторинг поглиненого готовим продуктом випромінювання за допомогою встановлених методів дозиметрів незалежно від величини дози. Дозиметри калібрують по відношенню до стандартного джерела на еталонній радіаційній установці при отриманні від постачальника і потім періодичністю, що не перевищує одного року.

Якщо передбачено біологічну оцінку, її проводять з використанням біологічних індикаторів.

БІОЛОГІЧНІ ІНДИКАТОРИ СТЕРИЛІЗАЦІЇ

Біологічні індикатори – це стандартизовані препарати певних мікроорганізмів, які використовуються для оцінки ефективності стерилізації.

Біологічний індикатор зазвичай є суперечками бактерій, нанесені на інертний носій, наприклад, смужку фільтрувального паперу, скляну пластинку або пластикову пробірку. Інокульований носій ізолюють так, щоб запобігти його пошкодженню або забруднення і, в той же час, забезпечити контакт стерилізуючого агента з мікроорганізмами. Суспензії суперечка можуть перебувати в герметично запаяних ампулах.

Біологічні індикатори готують таким чином, щоб забезпечити їх збереження за певних умов; їм має бути зазначений термін придатності.

Ті ж штами бактерій, що використовують при виробництві біологічних індикаторів, можуть бути інокульовані безпосередньо в рідкий продукт, що підлягає стерилізації, або рідкий продукт, аналогічний стерилізується. У цьому випадку має бути доведено, що рідкий продукт не має інгібуючої дії на суперечки, особливо на їх проростання.

Для біологічного індикатора вказують такі характеристики: вид бактерій, що використовуються як еталонні мікроорганізми; номер штаму у вихідній колекції; число життєздатних суперечок, що припадає на носій; величину D.

Величина D- Значення параметра стерилізації (тривалість або поглинена доза), що забезпечує зниження кількості життєздатних мікроорганізмів до 10% від їх вихідного числа. Ця величина має сенс для певних експериментальних умов стерилізації. Біологічний індикатор повинен містити лише зазначені мікроорганізми. Допускається використання біологічних індикаторів, що містять більше одного виду бактерій на одному носії. Повинна бути вказана інформація про живильне середовище та умови інкубації.

Рекомендується розміщувати індикатори в областях, найменш доступних для агента, що стерилізує, визначених попередньо емпірично або на підставі попередніх фізичних вимірювань. Після дії стерилізуючого агента носій спор переносять на живильне середовище в асептичних умовах.

Допускається використання біологічних індикаторів промислового виробництвау закритих ампулах з живильним середовищем, поміщених безпосередньо в упаковку, що захищає інокульований носій.

Вибір еталонних мікроорганізмів для біологічних індикаторів здійснюють з урахуванням таких вимог:

• – стійкість тест-штаму до конкретного методу стерилізації має бути вищою порівняно зі стійкістю всіх патогенних мікроорганізмів та інших мікроорганізмів, що контамінують продукт;
• – тест-штам має бути непатогенним;
• - Тест-штам повинен легко культивуватися.

Якщо після інкубації спостерігається зростання еталонних мікроорганізмів, це свідчить про незадовільно проведений процес стерилізації.

Особливості застосування біологічних індикаторів стерилізації

Стерилізація насиченою парою під тиском

Біологічні індикатори контролю стерилізації насиченою парою під тиском рекомендується використовувати при валідації циклів стерилізації. Рекомендується використовувати Bacillus stearothermophilus(наприклад, ATCC 7953, NCTC 10007, NCIMB 8157 або CIP 52.81). Число життєздатних суперечок має перевищувати 5 · 10 5 на носій. Величина Dпри температурі 121 °С має становити понад 1,5 хв. При обробці біологічного індикатора парою при температурі (121 ± 1) °С під тиском 120 кПа протягом 6 хв має спостерігатися збереження життєздатних суперечок, а обробка за тієї ж температури протягом 15 хв повинна призводити до повної загибелі еталонних мікроорганізмів.

Повітряна стерилізація

Рекомендується використовувати для виготовлення біологічних індикаторів Bacillus subtilis(наприклад, var. niger ATCC 9372, NCIMB 8058 або CIP 77.18). Число життєздатних суперечок має перевищувати 1 ∙ 10 5 на носій, величина Dза нормальної температури 160 °З становить 1 – 3 хв. Для стерилізації та депірогенізації скляного обладнання часто використовують гаряче повітря за температури понад 220 °С. У цьому випадку заміною біологічним індикаторам може бути зниження на 3 порядку кількості термостійких бактеріальних ендотоксинів.

Радіаційна стерилізація

Біологічні індикатори можуть використовуватися для моніторингу поточних операцій як додаткову оцінку ефективності встановленої дози випромінювання, особливо у разі стерилізації прискореними електронами. Рекомендуються суперечки Bacillus pumilus(наприклад, ATCC 27.142, NCTC 10327, NCIMB 10692 або CIP 77.25). Число життєздатних суперечок має перевищувати 1 ∙ 10 7 на носій. Величина Dмає становити понад 1,9 кГр. Слід переконатися, що після опромінення біологічного індикатора дозою 25 кГр (мінімальна поглинена доза) зростання еталонних мікроорганізмів немає.

Газова стерилізація

Використання біологічних індикаторів необхідне під час проведення всіх процедур газової стерилізації як із валідації циклів, і під час проведення рутинних операцій. Рекомендується використовувати суперечки Bacillus subtilis(наприклад, var. niger ATCC 9372, NCIMB 8058 або CIP 77.18) при використанні етилену оксиду. Число життєздатних суперечок має перевищувати 5 · 10 5 на носій. Параметри стійкості такі: величина Dстановить більше 2,5 хв для випробування циклу при концентрації етилену оксиду 600 мг/л, температурі 54 °С та 60 % відносної вологості. Слід переконатися, що після 60-хвилинного циклу стерилізації із зазначеними параметрами не спостерігається зростання еталонних мікроорганізмів, тоді як після 15 хв циклу стерилізації при нижчій температурі (600 мг/л, 30 °С, 60 % вологості) життєздатність суперечка зберігається.

Біологічний індикатор повинен дозволяти виявляти недостатню вологість у стерилізаторі та продукті: при дії на нього етилену оксиду концентрації 600 мг/л при температурі 54 °С протягом 60 хв без зволоження повинна зберігатися життєздатність.