Методи визначення сечовини у крові. Клініко-діагностичне значення визначення сечовини. Норма та відхилення показників

Залізозв'язуюча здатність сироватки крові Залізозв'язуюча здатність сироватки крові (ЖСС) – показник, що характеризує здатність сироватки крові до зв'язування заліза. Залізо в організмі людини знаходиться в комплексі з білком – трансферином. ЖСС показує

Імуноферментний аналіз сироватки крові (ІФА) Розрізняють антитіла трьох класів: імуноглобуліни М, А, С JдМ, JдА, JС). Вони накопичуються у сироватці крові та секретах організму через різні проміжки часу від початку інфікування. При первинному інфікуванні першими

Індикан утворюється в печінці при знешкодженні індолу - отруйної речовини, що з'являється в кишечнику при гниття білків. Ось чому його вміст у сироватці крові помітно зростає за наявності гнильних процесів у кишечнику. Це знижує

Активність ферментів сироватки крові Ферменти (чи ензими) - це білки специфічної природи, які синтезуються у клітинах, каталізують біохімічні реакції (тобто. збільшують їх швидкість), які у нашому організмі, але самі у своїй залишаються незмінними. Можна, можливо

Креагінін та сечовина Найбільш важливим для оцінки ступеня порушення виділеної здатності нирок є визначення вмісту креатиніну та сечовини у крові та сечі. Ці речовини є кінцевими продуктами білкового обміну, утворюються в тканинах, циркулюють у

Сечовина Кінцевий продукт перетравлення – білковий обмін. Сечовини в організмі утворюється дуже багато, і вона постійно виводиться із сечею та згодом. Оскільки в молекулі сечовини міститься два іони аміаку, вона надає сечі аміачного запаху. А коли порушується робота

Визначення концентрації сечовини в крові широко використовується в діагностиці, застосовується для оцінки тяжкості патологічного процесу, для спостереження за перебігом захворювання та оцінки ефективності лікування.Однак не слід забувати, що на рівень сечовини в крові можуть впливати не лише патологічні, а й фізіологічні фактори (характер харчування, фізичне навантаженняі т. д.), а також прийом лікарських препаратів. Рівень сечовини може змінюватися як у бік підвищення, і зниження. При фізіологічних процесахступінь відхилення рівня сечовини від норми, як правило, незначна, тоді як за патології спостерігаються значні зрушення, причому ступінь зміни рівня сечовини залежить від тяжкості патологічного процесу.

Нормальні значення сечовини у крові

Концентрація сечовини у сироватці крові здорових дорослих становить 2,5 - 8,3 ммоль/л (660 мг/л). У жінок, порівняно з дорослими чоловіками, концентрація сечовини у сироватці крові зазвичай нижча. У людей похилого віку (старше 60 років) спостерігається деяке збільшення концентрації сечовини в сироватці крові (приблизно на 1 ммоль/л у порівнянні з нормою здорових дорослих людей), що обумовлено зниженням у літніх здатностей нирок концентрувати сечу.

У дітей рівень сечовини нижчий, ніж у дорослих, проте у новонароджених у перші 2 - 3 дні вміст її може досягати рівня дорослого (прояв фізіологічної азотемії, обумовленої підвищеним катаболізмом на тлі недостатнього надходження рідини у перші 2 - 3 доби життя та низького рівняклубочкової фільтрації). У разі гіпертермії, ексикозу цифри сечовини можуть зрости ще більше. Нормалізація настає до кінця першого тижня життя. Рівень сечовини у крові у недоношених 1 тиж. - 1,1 - 8,9 ммоль/л (6,4 - 63,5 мг/100 мл), у новонароджених - 1,4 - 4,3 ммоль/л (8,6 - 25,7 мг/100 мл) ), у дітей після періоду новонародженості – 1,8 – 6,4 ммоль/л (10,7 – 38,5 мг/100 мл).

Підвищення рівня сечовини у крові

Підвищення рівня сечовини у крові спостерігається при:

• вживанні в їжу надмірної кількості білка (внаслідок посиленого синтезу сечовини);
• дієті, бідній на іони хлору (компенсаторна, пристосувальна реакція, спрямована на підтримку колоїдно-осмотичного тиску крові);
• зневоднення організму: невгамовне блювання, профузний пронос і т. д. (внаслідок посиленої пасивної реабсорбції в ниркових канальцях);
• прийомі деяких лікарських препаратів: сульфаніламідів, левоміцетину, тетрацикліну, гентаміцину, фуросеміду, ізобарину, допегіту, невіграмону, лазиксу, анаболічних стероїдів, кортикостероїдів, тироксину у великій кількості;
• надмірному катаболізмі білка: лейкозі, паренхіматозній жовтяниці, тяжких інфекційних захворюваннях, непрохідності кишечника, опіку, дизентерії, шоці;
• порушення виведення сечовини, пов'язаного із захворюваннями нирок та сечовивідних шляхів: хронічні захворювання нирок (гломерулонефрит, пієлонефрит); обструкції сечовивідних шляхів (пухлини сечовивідних шляхів, передміхурової залози, нирково-кам'яна хвороба); гостра та хронічна ниркова недостатність;
• порушення виведення сечовини при захворюваннях та станах, не пов'язаних із захворюваннями нирок та сечовивідних шляхів: недостатність діяльності серця, гострий інфаркт міокарда; цукровий діабетз кетоацидозом, аддісонова хвороба та інші захворювання.

Підвищення рівня сечовини в крові, пов'язане з її посиленим утворенням або зниженням її фільтрації у нирках внаслідок порушення гемодинаміки, як правило, не досягає великих значень, вміст сечовини зазвичай не перевищує 13 ммоль/л.

Великі значеннярівня сечовини у крові спостерігаються при захворюваннях нирок. Так, концентрація сечовини у плазмі крові пацієнтів із хронічною нирковою недостатністю може досягати 40,0 – 50,0 ммоль/л. Особливо високий вміст сечовини (49,8 - 81,0 ммоль/л та вище) спостерігається при гострій нирковій недостатності. При цьому різко знижується виділення сечовини із сечею. Однак, слід зауважити, що збільшення вмісту сечовини не є ранньою ознакою порушення ниркової функції. Встановлено, що спочатку зростає рівень сечової кислоти, а потім сечовини та креатиніну, що є загрозливим симптомом. При різних захворюваннях нирок ступінь підвищення вмісту сечовини визначається характером ушкодження нефрону, рівнем інтоксикації, посиленим розпадом білка у тканині (у зв'язку з обмеженням білка у їжі ниркових хворих) та іншими факторами. Підвищення вмісту сечовини у крові до 16,0 ммоль/л поєднується з порушенням функції нирок середньої тяжкості, до 33,2 ммоль/л – тяжким, понад 49,8 ммоль/л – дуже тяжким порушенням із несприятливим прогнозом.

Збільшення вмісту сечовини у крові, що супроводжується синдромом інтоксикації, називається уремією. Зазвичай вважається, що сечовина не токсична і що супроводжує збільшення її вмісту синдром інтоксикації обумовлений накопиченням в організмі інших продуктів. Разом з тим слід мати на увазі, що сечовина відносно легко проходячи через плазматичні мембрани клітин, будучи осмотично. активною речовиною, захоплює в клітини паренхіматозних органів та воду. Це призводить до збільшення об'єму клітин (клітинної гіпергідратації) та порушення їх функціонального стану.

Зниження рівня сечовини у крові

Зменшення вмісту сечовини у крові спостерігається рідко:

• при вагітності (внаслідок фізіологічної гідремії);
• при дієті з низьким вмістом білка та високим вмістом вуглеводів, голодуванні;
• при парентеральному введенні рідин (внаслідок гіпергідратації);
• після гемодіалізу;
• при зниженому катаболізмі білків;
• прийому СТГ;
• при порушенні всмоктування у кишечнику, целіакії;
• при підвищеній утилізації білка (у пізні термінивагітності, у дітей віком до 1 року, при акромегалії);
• при вродженій недостатності або відсутності ферментів, що беруть участь в орнітиновому циклі сечовиноутворення;
• при особливо тяжких ураженнях печінки (печінкова недостатність), спричинених, зокрема, отруєнням фосфором, миш'яком та іншими гепатотропними отрутами; гострому некрозі печінки, печінковій комі, декомпенсованому цирозі, гепатитах (відомо, що печінка має великі функціональні резерви, здатність її до дезамінування та синтезу сечовини зберігається при виключенні з процесів обміну до 85% її тканини).

Література:

• Циганенко А. Я., Жуков В. І., М'ясоїдов В. В., Завгородній І. В. – Клінічна біохімія – Москва, «Тріада-Х», 2002 р.
• Слєпишева В. В., Балябіна М. Д., Козлов А. В. - Методи визначення сечовини
• Клінічна оцінка лабораторних тестів - за редакцією М. У. Тица - Москва, «Медицина», 1986
• Камишников В. С. - Кишеньковий довідник лікаря з лабораторної діагностики - Москва, МЕДпрес-інформ, 2007
• Маршалл Дж. - Клінічна біохімія - Москва, Санкт-Петербург, Біном, Невський Діалект, 2000 р.

Лекція №7

Тема «СИНТЕЗ КІНЦЕВИХ ПРОДУКТІВ БІЛКОВОГО ОБМІНУ».

План викладу

1. Джерела аміаку в організмі. Шляхи знешкодження. Синтез сечовини (орнітиновий цикл).

2. Уремія, класифікація. КДЗ визначення сечовини у крові та сечі.

3. Утворення креатиніну в організмі.

4. КДЗ визначення рівня креатиніну у сироватці крові та сечі.

5. Синтез сечової кислоти у організмі. КДЗ визначення у сироватці крові та сечі.

Джерела аміаку в організмі: 1. Амінокислоти.

2. Аміди АК; глутамін, аспарагін.

3 . Біогенні аміни.

4. Пуринові основи.

5. Піримидинові основи.

Аміак є токсичною речовиною для організму, особливо нервової системи.

Існує 5 шляхів знешкодження аміаку в організмі:

1. Біосинтез сечовини у печінці.

2. Відновлювальне амінування у тканинах.

3. Утворення амідів кислот у тканинах.

4. Утворення піримідинових основ у цитозолі клітин.

5. Утворення амонійних солей у нирках.

Основний шлях знешкодження аміаку в організмі – біосинтез сечовини у печінці.

У біосинтезі сечовини на першому етапі бере участь карбомоїлфосфатсинтетаза, локалізована в мітохондріях клітин тільки печінки.

У печінку аміак доставляється з мозку та інших тканин не у вільному вигляді, а у вигляді глутаміну, який глутаміназ гідролізується на аміак та глутамінову кислоту. З м'язів та кишечника аміак доставляється у вигляді аланіну.

Біосинтез сечовини (орнітиновий цикл):

· NH3 + CO2 + 2ATF = карбомоїлфосфат +2ADF.

· Карбомоїлфосфат + орнітин = цитрулін-ця амінокислота не кодується генетичним кодом і не використовується в синтезі білка

· Цитрулін взаємодіє з L-аспарагіновою кислотою = аргінінобурштинова кислота, яка розпадається на аргінін та фумарову кислоту за участю аргініносукцинатліази.

· Аргінін стає джерелом сечовини, після відщеплення, якою за допомогою аргінази знову виникає орнітин, замикаючи циклічний процес утворення сечовини.

Біологічне значення орнітінового циклу:

1.Знешкодження аміаку в організмі.

2. Регуляція азотистого балансу в організмі - на час вступу великої кількості білка в організм швидкість циклу зростає.

3. Поставляє фумарат у ЦТК.

4. Біосинтез замінних амінокислот через оксалоацетат.

5. Постачає оксалоацетат для біосинтезу глюкози.

Клінічне значення визначення аміаку.Визначення аміаку у крові має велике прогностичне значення при захворюваннях печінки. У нормі цільної крові міститься менше 65мкмоль/л. Із сечею на добу виділяється 0,5 г аміаку. При тяжких паренхіматозних ушкодженнях печінка не в змозі знешкодити аміак, що надходить. В результаті аміак накопичується у крові. Клінічні симптоми, загальні для порушень синтезу сечовини, є блювання (у дітей), відраза до багатих білками продуктів, порушення координації рухів, дратівливість, сонливість, розумова відсталість. Зміст аміаку у сечі є важливим показником стану кислотно-основної рівноваги. Кількість аміаку у сечі підвищується як при респіраторному, так і метаболічному ацидозі. Підвищення аміаку в сечі зустрічається при гарячкових станах, при цистопієлітах, гіперфункції кори надниркових залоз. Гіпераммоніємія зустрічається при 1 - вродженої недостатності ферментів біосинтезу сечовини, 2 - печінкової недостатності, 3 - надмірному споживанні білків, 4 - при кишкових кровотечах.

Клініко-діагностичне значення визначення сечовини.

Сама сечовина мало токсична. Токсичні іони калію, що накопичуються з нею, похідні гуанідину (гуанідінуцтова кислота, метилгуанідин), середньомолекулярні пептиди (МСМ). Тому сечовину розглядають як маркер інтоксикації.

Оскільки сечовина легко проходить через мембрани клітин та Er і є осмотично активною речовиною, вона зумовлює порушення водно-сольового обміну, захоплюючи за собою воду, викликає набряк тканин, міокарда, ЦНС. Збільшення в кілька разів концентрації сечовини, що супроводжується клінічним синдромом інтоксикації – уремія.

Позаниркова ретенційна уремія: рефлекторна анурія, пухлини та каміння в сечовивідних шляхах, і т.д.

Продукційна уреміявиникає при посиленому розпаді білка - перитоніті, опіках, холері, тяжких інфекційних захворюваннях, гострому інфаркті міокарда, блюванні, проносі.

Відносна: при дизентерії.

Оскільки сечовина утворюється у печінці, то при паренхіматозній жовтяниці, гострій дистрофії печінки, цирозі рівень сечовини знижується, а концентрація залишкового азоту в нормі чи підвищена.

Зниження рівня сечовини спостерігається за порушення всмоктування в кишечнику (целіакія), парентеральному харчуванні, акромегалії.

Сечовина - складова частиназалишкового азоту крові-50%;

Крім сечовини до залишкового азоту крові входять:

амінокислоти 25%;

креатину 5%, креатиніну 2,5%;

сечова кислота 4%.

Залишковий азот підвищується за рахунок сечовини у хворих на ниркову недостатність (печінкова недостатність - залишковий азот підвищується за рахунок амінокислот та аміаку).

У клініці визначення сечовини має значення у діагностиці захворювань нирок. Визначення концентрації сечовини технічно простіше, ніж залишкового азоту і вміст сечовини при нирковій патології наростає швидше, ніж решти компонентів залишкового азоту.

Принцип методу : сечовина під дією ферменту уреази розкладається на СО 2 і NН 3 останній в реакції з саліцилат натрію і гіпохлоридом натрію в присутності нітропрусиду натрію утворює забарвлений продукт, інтенсивність забарвлення якого пропорційна концентрації сечовини в пробі.

Реактиви та обладнання: 1) реагент 1 – розчин уреази у фосфатному буфері; розчин саліцилату натрію та нітропрусиду натрію; 2) реагент 2 – розчин гіпохлориту натрію та гідроксиду натрію; 3) зразки сироватки крові; 4) калібрувальний розчин сечовини з концентрацією 5,0 ммоль/л; 5) пробірки, піпетки; 6) термостат; 7) ФЕК.

Хід роботи:

Проби перемішати та інкубувати 5 хв при температурі 37 0 С, потім додати:

Після додавання реагенту проби 2 промішати і інкубувати 5 хв при температурі 37 0 С.

Виміряти оптичну щільність дослідної (Д) та калібрувальної (Д к) проб проти контрольної проби при λ = 610 нм. Забарвлення стабільне протягом 2 год.

Результати: Д 1 =

Для розрахунку концентрації сечовини використати формулу:

С=Д 1 /Д до х 5,0 (ммоль/л)

З 2 = Норма: 2,5 - 8,3 ммоль/л

Висновки:

Кількісне визначення сечовини у сечі кольоровою реакцією з парадиметиламінобензальдегідом

Принцип методу : сечовина, взаємодіючи з парадиметиламінобензальдегідом у кислому середовищі, утворює забарвлене в жовто-зелений колір сполуку. Інтенсивність забарвлення пропорційна концентрації сечовини у пробі. Оптичну густину розчину визначають методом фотоелектроколориметрії.

Реактиви та обладнання: 1) 2%-водний розчин парадиметиламіно-бензальдегіду (пДАБ); 2) зразки сечі; 3) пробірки; 4) піпетки; 5) ФЕК.

Хід роботи: до 0,5 мл сечі (попередньо розведеної у 100 разів) додати 2,5 мл 2% водного розчинупДАБ і ретельно перемішати. Через 15 хв визначити оптичну щільність розчину на ФЕК, використовуючи синій світлофільтр (=400 нм) та кювети з робочою відстанню 10 мм. Як розчин порівняння використовувати контроль, що містить 0,5 мл води і 2,5 мл 2% водного розчину пДАБ. Визначити вміст сечовини у пробі (мг/мл) з використанням калібрувального графіка. Розрахувати вміст сечовини в сечі

ммоль/добу.

Результати: D 1 = З 1 = мг/мл

D 2 = 2 = мг/мл

Формула: С. В. 1,5. 16,6 = (ммоль/добу)

де С – концентрація сечовини мг/мл

(за калібрувальним графіком)

В – розведення сечі (100 разів)

1,5 – середньодобовий діурез (л)

16,6 - коефіцієнт перерахунку в одиницях СІ

(Діацетилмонооксимний метод)

Сечовина – продукт, що утворюється у печінці при знешкодженні аміаку. Сечовина – основний кінцевий продукт обміну білків. Приблизно 50% небілкового, залишкового азоту крові посідає частку сечовини.

ПРИНЦИП МЕТОДУ:сечовина утворює з діацетилмонооксимом у сильнокислому середовищі в присутності тіосемікарбазиду та іонів тривалентного залізакомплексне з'єднання червоного кольору, за інтенсивністю забарвлення якого визначають його концентрацію.

ХІД РОБОТИ:взяти три пробірки: досвід, стандарт, контроль.

Всі пробірки помістити у водяну лазню за температури 100 про С протягом 5 хвилин.

Охолодити та провести вимірювання екстинкції проти контролю при 500-560 нм; кювети 5 мм. Вимірювання проводять у межах 15 хвилин.

РЕЗУЛЬТАТ:

З ст = 16,65 ммоль/л.

КІНЦЕВИЙ РЕЗУЛЬТАТ:розраховують за формулою:

З оп = ----- · 16,65 = ммоль/л.

Нормальний вміст сечовини у сироватці крові у дорослих 2,5 – 8,33 ммоль/л; у сечі 333 - 582 ммоль/добу. У новонароджених у сироватці крові нормальний вміст сечовини становить 3,5-11 ммоль/л, у дітей 2-14 років 2,5-8,33 ммоль/л.

Незначне підвищення концентрації сечовини в сироватці спостерігається при надмірному харчуванні білковими продуктами, при старінні.

Значне збільшення концентрації сечовини у сироватці крові (уремія) спостерігається при нирковій недостатності, зневодненні (блювання, пронос), шоці, посиленому розпаді білків, сепсисі.

Знижений вміст сечовини у сироватці крові відзначається при паренхіматозному гепатиті, цирозі (різке зниження сечовиноосвітньої функції печінки), еклампсії, під час вагітності.

Знижений вміст сечовини у сечі відзначається при нефриті, ацидозі, паренхіматозній жовтяниці, цирозі печінки.

ВИСНОВОК:

Дата ________________

ЗАНЯТТЯ № 31

САМОСТІЙНА АУДИТОРНА РОБОТА

ЗА ТЕМОЮ «ОБМІН І ФУНКЦІЇ АМІНОКИСЛОТ. ОБМІН НУКЛЕОТИДІВ»

Завдання для самостійної роботи:

1. 1.Скласти метаболічну карту амінокислотного обміну.

2. На карті відзначити:

2.1. Джерела амінокислот у тканинах.

2.2. Шляхи перетворення амінокислот у тканинах.

2.3. Регуляторні ферменти гліколізу, метаболізму глікогену, глюконеогенезу, пентозофосфатного шляху.

2.4. Вітамінзалежні ферменти.

3. Рішення та обговорення ситуаційних завдань.

Дата: ________________

ЗАНЯТТЯ № 33

РОБОТА № 1. ЯКІСНЕ І КІЛЬКІЗНЕ ВИЗНАЧЕННЯ БІЛІРУБІНА
(ЗА МЕТОДОМ ЙЕНДРАШИКА)

ОБГРУНТУВАННЯ ВИКОНАННЯ РОБОТИ.При руйнуванні еритроцитів (у людини через 100-120 днів) у клітинах ретикулоендотеліальної системи кісткового мозку, селезінки, печінки відбувається розпад гемоглобіну. Кінцевим продуктом розпаду гему є непрямий білірубін, який надходить у кров і транспортується альбумінами до печінки, де відбувається його знешкодження з утворенням прямого білірубіну.

У сироватці крові є два види білірубіну. Основна форма - це непрямий (вільний) білірубін, який не пов'язаний з глюкуроновою кислотою та дає непряму діазореакцію. У крові міститься незначна кількість прямого (пов'язаного) білірубіну – цей білірубін пов'язаний з глюкуронатом і дає пряму діазореакцію. Сума обох пігментів дає загальний білірубін.

Порушення обміну білірубіну супроводжується розвитком жовтяниці. У зв'язку з цим роздільне кількісне визначення загального, прямого та непрямого білірубіну у сироватці крові має значення для диференціальної діагностики. різних типівжовтяниця.

ПРИНЦИП МЕТОДУ:діазореактив дає з прямим білірубіном рожеве фарбування. Непрямий білірубін переводять у розчинний стан додаванням до сироватки кофеїнового реактиву, після цього загальний білірубін визначається діазорі. Інтенсивність фарбування прямо пропорційна концентрації білірубіну в пробі.

ХІД РОБОТИ:взяти три пробірки: досвід 1, 2 та контроль.

Вміст пробірок перемішати та інкубувати

при температурі 18°С.

ДОСВІД 1 - фотометрія через 10 хвилин

Проти контролю

ДОСВІД 2 - фотометрія через 20 хвилин

Довжина хвилі: 530-550 нм, кювета 5 мм.

РЕЗУЛЬТАТ:

КІНЦЕВИЙ РЕЗУЛЬТАТ:знаходять за калібрувальним графіком. За різницею між кількістю загального та прямого білірубіну визначають рівень непрямого білірубіну.

Прямий білірубін:

С = мкмоль/л

Загальний білірубін:

С = мкмоль/л

Непрямий білірубін:

С = мкмоль/л

КЛІНІКО-ДІАГНОСТИЧНЕ ЗНАЧЕННЯ.

Нормальний вміст загального білірубіну в сироватці у дорослих 5,0 - 20,5 мкмоль/л; пов'язаного білірубіну (прямого) - 1,0 - 7,5 мкмоль/л; вільного білірубіну (непрямого) – 1,7 – 17,1 мкмоль/л.

У новонароджених нормальний вміст загального білірубіну в сироватці крові становить 12-20 мкмоль/л, у дітей 2-14 років 8,55-20,52 мкмоль/л.

Підвищений вміст загального білірубіну у сироватці крові відзначається при жовтяниці новонароджених, ушкодженні гепатоцитів (запальному, токсичному), закупорці жовчних проток, гемолітичній хворобі.

При паренхіматознийжовтяниці:

У крові підвищується вміст прямого та непрямого білірубіну;

У сечі з'являється прямий білірубін та уробіліноген.

Зменшується виділення стеркобіліну з калом.

При обтураційної(механічної) жовтяниці:

У крові підвищується вміст прямого білірубіну;

У сечі утворюється прямий білірубін (чорна сеча);

Відсутнє виділення стеркобіліну (ахолічний кал).

При гемолітичноїжовтяниці:

У крові підвищується вміст непрямого білірубіну;

У сечі підвищується вміст стеркобіліногену;

Збільшується виділення стеркобіліну (темний кал).

ВИСНОВОК:

Дата ______________

ЗАНЯТТЯ № 34

Подібна інформація.